雷公藤紅素對實驗性克羅恩病的保護作用及機制的研究.pdf

1、背景：近年來克羅恩病的發(fā)病率呈上升趨勢。目前用于治療克羅恩病的主要有氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和抗生素等傳統(tǒng)藥物及新興的生物制劑。盡管治療克羅恩病的藥物很多，但都因各種副反應(yīng)或其效用可疑而不能長期應(yīng)用。由于克羅恩病可累及整個消化道并且有終身復(fù)發(fā)傾向，外科手術(shù)也只限于克羅恩病并發(fā)癥的處理。 克羅恩病的確切病因尚未明了，猜測與遺傳、免疫和感染有關(guān)。可能是具有遺傳易感性的人產(chǎn)生了對共生菌過度的免疫反應(yīng)，促炎細胞因子的過度表

2、達和淋巴細胞的過度激活導(dǎo)致了克羅恩病的腸道炎癥。研究發(fā)現(xiàn)TNF-a、IL-1β、VCAM-1和NF-κB在克羅恩病的發(fā)病機制中具有重要地位。 雷公藤紅素是從衛(wèi)矛科植物雷公藤中提取的三萜類單體。研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤紅素對巨噬細胞分泌TNF-a、IL-1β等促炎細胞因子具有抑制作用，并可抑制內(nèi)皮細胞合成及表達VCAM-1等粘附分子，此外還對NF-κB活性有強的抑制作用。由此，我們設(shè)想雷公藤紅素可能對克羅恩病具有一定的治療作用，而國內(nèi)外目

3、前尚無雷公藤紅素用于克羅恩病動物模型的研究報道。本實驗擬用雷公藤紅素對實驗性克羅恩病進行干預(yù)，觀察其療效，并進一步從細胞因子的角度去探討其可能機制，為日后將雷公藤紅素用于臨床治療克羅恩病提供理論依據(jù)。 目的：本實驗研究雷公藤紅素對2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇誘導(dǎo)的實驗性克羅恩病模型的保護作用，并從細胞因子的角度去探討雷公藤紅素的可能作用機制。 方法：40只雌性未育Sprague-Dawley大鼠隨機分為5組

4、，每組各8只。除空白對照組外，其余大鼠結(jié)腸內(nèi)灌入TNBS/乙醇溶液（含TNBS 30mg）制備實驗性克羅恩病模型。TNBS對照組造模后不予任何處理，造模后助溶劑溶液（乙醇6％，吐溫80 1％）1ml/kg?d腹腔注射為助溶劑對照組，造模后雷公藤紅素溶液（雷公藤紅素0.5mg/ml、乙醇6％和吐溫80 1％）0.5mg/kg?d腹腔注射為雷公藤紅素低劑量組，雷公藤紅素溶液1mg/kg?d腹腔注射為雷公藤紅素高劑量組。通過觀察大鼠一般情況、

5、結(jié)腸大體病理和組織病理來評價雷公藤紅素對實驗性克羅恩病的治療效果。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測結(jié)腸組織TNF-a mRNA、VCAM-1 mRNA和IL-1βmRNA的表達，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)腸組織NF-κB P65蛋白的表達，并進一步分析結(jié)腸組織NF-κB P65表達水平與結(jié)腸大體和組織病理損傷指數(shù)、TNF-a mRNA、VCAM-1 mRNA和IL-1βmRNA的表達水平之間的關(guān)系。 結(jié)果：雷公藤紅

6、素高、低劑量組大鼠的癥狀均輕于TNBS和助溶劑對照組；雷公藤紅素高、低劑量組大鼠的結(jié)腸大體病理和組織病理的病變程度均明顯輕于TNBS和助溶劑對照組（P<0.05），結(jié)腸組織TNF-a mRNA、VCAM-1 mRNA、IL-1βmRNA和NF-κB P65蛋白的表達水平雷公藤紅素高、低劑量組均明顯低于TNBS和助溶劑對照組（P<0.05）。相關(guān)分析顯示，結(jié)腸組織NF-κB P65表達水平和結(jié)腸大體及組織病理損傷指數(shù)、IL-1βmRNA、

7、TNF-a mRNA和VCAM-1 mRNA的表達水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.7973，P=0.0001；r=0.8613，P=0.0001；r=0.7589，P=0.0001；r=0.7031，P=0.0001和r=0.6408，P=0.0001）。 結(jié)論：高、低劑量的雷公藤紅素均能緩解實驗性克羅恩病的腸道炎癥，雷公藤紅素通過抑制NF-κB，下調(diào)促炎細胞因子TNF-a、IL-1β和粘附分子VCAM-1的基因轉(zhuǎn)錄，從而對實驗性