雷公藤紅素對(duì)實(shí)驗(yàn)性克羅恩病的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、背景：近年來克羅恩病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前用于治療克羅恩病的主要有氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和抗生素等傳統(tǒng)藥物及新興的生物制劑。盡管治療克羅恩病的藥物很多，但都因各種副反應(yīng)或其效用可疑而不能長期應(yīng)用。由于克羅恩病可累及整個(gè)消化道并且有終身復(fù)發(fā)傾向，外科手術(shù)也只限于克羅恩病并發(fā)癥的處理。 克羅恩病的確切病因尚未明了，猜測(cè)與遺傳、免疫和感染有關(guān)。可能是具有遺傳易感性的人產(chǎn)生了對(duì)共生菌過度的免疫反應(yīng)，促炎細(xì)胞因子的過度表

2、達(dá)和淋巴細(xì)胞的過度激活導(dǎo)致了克羅恩病的腸道炎癥。研究發(fā)現(xiàn)TNF-a、IL-1β、VCAM-1和NF-κB在克羅恩病的發(fā)病機(jī)制中具有重要地位。 雷公藤紅素是從衛(wèi)矛科植物雷公藤中提取的三萜類單體。研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤紅素對(duì)巨噬細(xì)胞分泌TNF-a、IL-1β等促炎細(xì)胞因子具有抑制作用，并可抑制內(nèi)皮細(xì)胞合成及表達(dá)VCAM-1等粘附分子，此外還對(duì)NF-κB活性有強(qiáng)的抑制作用。由此，我們?cè)O(shè)想雷公藤紅素可能對(duì)克羅恩病具有一定的治療作用，而國內(nèi)外目

3、前尚無雷公藤紅素用于克羅恩病動(dòng)物模型的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬用雷公藤紅素對(duì)實(shí)驗(yàn)性克羅恩病進(jìn)行干預(yù)，觀察其療效，并進(jìn)一步從細(xì)胞因子的角度去探討其可能機(jī)制，為日后將雷公藤紅素用于臨床治療克羅恩病提供理論依據(jù)。 目的：本實(shí)驗(yàn)研究雷公藤紅素對(duì)2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性克羅恩病模型的保護(hù)作用，并從細(xì)胞因子的角度去探討雷公藤紅素的可能作用機(jī)制。 方法：40只雌性未育Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為5組

4、，每組各8只。除空白對(duì)照組外，其余大鼠結(jié)腸內(nèi)灌入TNBS/乙醇溶液（含TNBS 30mg）制備實(shí)驗(yàn)性克羅恩病模型。TNBS對(duì)照組造模后不予任何處理，造模后助溶劑溶液（乙醇6％，吐溫80 1％）1ml/kg?d腹腔注射為助溶劑對(duì)照組，造模后雷公藤紅素溶液（雷公藤紅素0.5mg/ml、乙醇6％和吐溫80 1％）0.5mg/kg?d腹腔注射為雷公藤紅素低劑量組，雷公藤紅素溶液1mg/kg?d腹腔注射為雷公藤紅素高劑量組。通過觀察大鼠一般情況、

5、結(jié)腸大體病理和組織病理來評(píng)價(jià)雷公藤紅素對(duì)實(shí)驗(yàn)性克羅恩病的治療效果。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)結(jié)腸組織TNF-a mRNA、VCAM-1 mRNA和IL-1βmRNA的表達(dá)，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)結(jié)腸組織NF-κB P65蛋白的表達(dá)，并進(jìn)一步分析結(jié)腸組織NF-κB P65表達(dá)水平與結(jié)腸大體和組織病理損傷指數(shù)、TNF-a mRNA、VCAM-1 mRNA和IL-1βmRNA的表達(dá)水平之間的關(guān)系。 結(jié)果：雷公藤紅

6、素高、低劑量組大鼠的癥狀均輕于TNBS和助溶劑對(duì)照組；雷公藤紅素高、低劑量組大鼠的結(jié)腸大體病理和組織病理的病變程度均明顯輕于TNBS和助溶劑對(duì)照組（P<0.05），結(jié)腸組織TNF-a mRNA、VCAM-1 mRNA、IL-1βmRNA和NF-κB P65蛋白的表達(dá)水平雷公藤紅素高、低劑量組均明顯低于TNBS和助溶劑對(duì)照組（P<0.05）。相關(guān)分析顯示，結(jié)腸組織NF-κB P65表達(dá)水平和結(jié)腸大體及組織病理損傷指數(shù)、IL-1βmRNA、

7、TNF-a mRNA和VCAM-1 mRNA的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.7973，P=0.0001；r=0.8613，P=0.0001；r=0.7589，P=0.0001；r=0.7031，P=0.0001和r=0.6408，P=0.0001）。 結(jié)論：高、低劑量的雷公藤紅素均能緩解實(shí)驗(yàn)性克羅恩病的腸道炎癥，雷公藤紅素通過抑制NF-κB，下調(diào)促炎細(xì)胞因子TNF-a、IL-1β和粘附分子VCAM-1的基因轉(zhuǎn)錄，從而對(duì)實(shí)驗(yàn)性