雷公藤紅素防治人工關(guān)節(jié)磨損顆粒誘導(dǎo)骨溶解的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過體內(nèi)外實驗觀察不同劑量和細胞培養(yǎng)濃度雷公藤紅素對磨損顆粒誘導(dǎo)的小鼠顱蓋骨骨溶解及破骨細胞分化的影響，為將來雷公藤紅素應(yīng)用于防治人工關(guān)節(jié)磨損顆粒誘導(dǎo)的骨溶解提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　體外實驗中，先通過CCK-8法確定雷公藤紅素對小鼠BMMs來源的單核-巨噬細胞的安全濃度范圍；然后，在無毒濃度范圍內(nèi)，觀察給予不同濃度雷公藤紅素刺激后，對M-CSF和RANKL誘導(dǎo)小鼠BMMs來源的單核-巨噬細胞分化為破

2、骨細胞的影響。體內(nèi)實驗中，將20只6周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機分為4組，空白對照組（Sham組）、單純磨損顆粒組(Vehicle組)、磨損顆粒+低劑量雷公藤紅素組(Low組1 mg/kg)和磨損顆粒+高劑量雷公藤紅素組(High組3 mg/kg)。利用磨損顆粒誘導(dǎo)小鼠顱骨骨溶解模型，分別按3mg/kg(高劑量組)、1mg/kg(低劑量組)雷公藤紅素的劑量腹腔注射，隔日給藥，空白對照組和單純顆粒組小鼠注射同等體積的生理鹽水。建模2周

3、后采用摘除眼球法取血后處死小鼠，完整取下小鼠顱蓋骨標本。小鼠血清通過ELISA試劑盒檢測與骨吸收代謝特征性指標TRAP5b和CTX-Ⅰ的表達水平；小鼠顱蓋骨先進行Micro-CT掃描，統(tǒng)計分析各項骨參數(shù),再通過制作病理切片HE染色觀察顱骨組織形態(tài)并進行定量分析。
　　結(jié)果：
　　不同劑量、濃度雷公藤紅素處理組小鼠存活及細胞增殖均未受到影響。體外實驗發(fā)現(xiàn)，在安全濃度范圍內(nèi)，雷公藤紅素可以顯著抑制小鼠BMMs來源的單核-巨噬細胞

4、向破骨細胞分化。體內(nèi)實驗中，磨損顆粒能夠有效誘導(dǎo)小鼠顱蓋骨溶解，在給予雷公藤紅素治療后，顱蓋骨骨溶解被明顯抑制了，而且這種抑制效應(yīng)表現(xiàn)出劑量依賴性。小鼠顱蓋骨經(jīng)Micro-CT掃描后，統(tǒng)計分析感興趣區(qū)域（ROI）的各項骨參數(shù)，骨礦物質(zhì)密度（BMD）、骨體積分數(shù)（BVF）和骨孔隙率的結(jié)果進一步證實了上述結(jié)論。小鼠顱骨組織切片HE染色發(fā)現(xiàn)，在雷公藤紅素治療組內(nèi)，炎癥細胞浸潤、骨質(zhì)破壞明顯減少。小鼠血清TRAP5b和CTX-Ⅰ檢測發(fā)現(xiàn)，藥物組