HU-308對磨損顆粒誘導(dǎo)骨溶解影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 磨損顆粒誘導(dǎo)的假體周圍骨溶解是人工關(guān)節(jié)無菌性松動的主要因為。防治骨溶解的核心在于恢復(fù)假體周圍骨量,而骨量的維持取決于骨改建過程,涉及破骨細胞骨與成骨細胞骨數(shù)量與功能的調(diào)控。既往的研究顯示HU-308影響骨代謝,對磨損顆粒誘導(dǎo)的骨溶解的防治具有潛在的研究及應(yīng)用價值。本課題通過對HU-308在體外對成骨細胞和破骨細胞作用及體內(nèi)對磨損顆粒誘導(dǎo)的骨溶解中骨改建過程作用的研究,探討其對防治骨溶解的作用及機理；并初步探討四環(huán)素

2、類標記物對骨改建過程的潛在影響。
　　 方法：
　　 1.取健康自愿者的骨髓基質(zhì)干細胞,分別檢測其在成骨誘導(dǎo)中不同時間段大麻素類CB2受體的表達狀況,同時檢測不同濃度的HU-308對成骨細胞活性標志物堿性磷酸酶表達及鈣化結(jié)節(jié)形成的影響；
　　 2.購買已分離純化后的新鮮健康正常人濃縮白細胞,分離提取單個核細胞,誘導(dǎo)破骨細胞分化生成。檢測CB2受體及破骨細胞分化標志基因在誘導(dǎo)分化中的不同階段的破骨細胞上的表達狀況；

3、免疫熒光化學(xué)染色法檢測CB2受體在破骨細胞及其前體細胞上的表達；檢測不同濃度的HU-308對破骨細胞生成及吸收功能的作用；
　　 3.利用流式細胞技術(shù)Annexin V-PI染色法檢測不同濃度HU-308對破骨細胞及其前體細胞凋亡的影響；Western blotting技術(shù)檢測HU-308作用下凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bcl-2、Bak、p53和Activated caspase-3的合成狀況；
　　 4.用UHMWPE顆粒誘導(dǎo)的小

4、鼠顱骨溶解模型,給予HU-308干預(yù),通過對骨溶解區(qū)域的骨生成和骨吸收參數(shù)分析,檢測HU-308體內(nèi)對磨損顆粒誘導(dǎo)骨溶解過程的影響；
　　 5.取健康自愿者的外周血,提取單個核細胞,檢測不同濃度的脫氧土霉素、鹽酸四環(huán)素、茜素紅S和鈣黃綠素對破骨細胞生成及骨吸收功能的影響,以及對破骨細胞前體細胞凋亡的影響；Wistar大鼠分別于實驗的第1天和第7天注射上述熒光標志物對新生骨進行雙標記,應(yīng)用Van Gilson和TRAP染色,評估其

5、對骨改建參數(shù)(包括骨礦沉積率、標化礦化表面積、骨形成率、平均破骨細胞數(shù)、破骨細胞面積、TRAP活力、骨膠原保存率等)的影響；
　　 結(jié)果：
　　 1.CB2受體mRNA進行性表達在成骨誘導(dǎo)中的成骨細胞上。在成骨誘導(dǎo)第7天時未發(fā)現(xiàn)表達,在第10天的成骨細胞中開始表達,21天明顯表達。HU-308不影響成骨細胞ALP的表達,但促進成骨細胞鈣化結(jié)節(jié)的生成,并存在量效關(guān)系；
　　 2.CB2受體m RNA表達在人破骨細胞

6、及其前體細胞上。HU-308抑制破骨細胞生成及骨吸收功能,并存在量效關(guān)系；
　　 3.HU-308促進凋亡蛋白Bcl-2、p53和Activated caspase-3蛋白的合成,而對Bak蛋白合成無影響,從而誘導(dǎo)破骨細胞及其前體細胞凋亡；
　　 4.HU-308體內(nèi)增加新骨生成量、顱骨厚度和顱骨標記熒光厚度,但對顱骨長度無影響,抑制骨吸收面積和破骨細胞生成；
　　 5.土霉素和四環(huán)素體外劑量依賴性的誘導(dǎo)破骨細胞

7、前體細胞凋亡,體內(nèi)及體外抑制破骨細胞生成和骨吸收,而對骨生成參數(shù)無影響。
　　 結(jié)論：
　　 1.HU-308體外通過CB2受體劑量依賴性促進成骨細胞增生；
　　 2.HU-308體外通過CB2受體劑量依賴性的抑制破骨細胞生成及吸收功能；
　　 3.HU-308體外通過調(diào)節(jié)破骨細胞及其前體細胞多種凋亡蛋白的合成,誘導(dǎo)破骨細胞凋亡；
　　 4.HU-308體內(nèi)抑制破骨細胞吸收并且同時促進骨生成,對骨