瘦素促進肺癌細胞的增殖并通過ERK1-2通路上調(diào)VEGF表達.pdf

1、目的: 研究瘦素、瘦素受體、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在肺癌組織和正常肺組織中的表達，結(jié)合臨床病理資料進行分析，探討瘦素、瘦素受體、VEGF的表達與肺癌生長，浸潤和轉(zhuǎn)移的關系。并通過研究瘦素在體外對A549人肺腺癌細胞的增殖及VEGF表達的影響，探討瘦素在肺癌血管生成中的作用及其對VEGF的調(diào)控機制。
　　 方法:
　　 1.采用免疫組織化學法檢測40例人肺癌組織及40例正常肺組織中瘦素、瘦素受體、VEGF的表達情況，

2、分析三者在肺癌組織中的表達及其與肺癌病期、病理類型之間的關系。
　　 2.對A549人肺腺癌細胞進行細胞培養(yǎng)，采用四甲基偶氮唑鹽比色（MTT） 法檢測不同濃度瘦素對A549人肺腺癌細胞增殖影響；免疫細胞化學法瘦素對VEGF蛋白表達的影響；免疫印跡（western blot）法檢測瘦素對P-ERK1/2、VEGF蛋白表達的影響。
　　 3.用ERK1/2抑制劑PD98059預處理A549細胞后，再與160ng/ml瘦素共孵

3、育，采用western blot法檢測VEGF蛋白表達的變化，進一步探索瘦素誘導VEGF蛋白表達增加的可能機制。
　　 結(jié)果:
　　 1.肺癌及正常肺組織瘦素的陽性表達率分別為83.5％、31.2％，瘦素受體的陽性表達率分別為67.5％、37.5％，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。瘦素及瘦素受體的表達在不同性別、年齡、腫物大小、病理類型等組間比較，差異無顯著性(P>0.05)。瘦素及瘦素受體表達在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

4、比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率高，在III+IV期組表達較I+II期組高，差異有顯著性(P<0.05)。VEGF在肺癌及正常肺組織中的陽性表達率分別為80％、12.5％，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。VEGF的表達在不同性別、年齡、腫物大小、病理類型等組間比較，差異無顯著性(P>0.05)。VEGF在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，在III+IV期組表達亦較I+II期組高(P<0.05)。
　　 2.MTT法檢測結(jié)

5、果：在一定范圍內(nèi)，瘦素呈時間、劑量依賴性促進A549細胞的生長(P<0.05)。當瘦素濃度為40 ng/ml ，80ng/ml，160 ng/ml時，在24h至48h，對A549的增殖率呈上升趨勢，而到72h其增殖率反而下降，且瘦素在320ng/ml濃度時其增殖率并未上升，其機制可能與藥物的受體飽和度有關。
　　 3.免疫細胞化學結(jié)果：A549細胞中瘦素、瘦素受體、VEGF均有陽性表達，陽性著色均以細胞漿為主，呈棕黃色。陰性對照

6、組、瘦素80ng/ml、160ng/ml組中，VEGF 的染色灰度值分別為115.33±7.26、133.54±10.22、150.65±9.39，隨著瘦素濃度的增加VEGF染色強度逐漸增高，與陰性對照組相比有顯著差異(P<0.05)。
　　 4.western-blot結(jié)果顯示：隨著瘦素濃度的增加P-ERK1/2、VEGF 蛋白表達水平逐漸增高，與陰性對照組相比有顯著差異(P<0.05)。應用ERK1/2抑制劑PD98059預

7、處理A549細胞后，再與160ng/ml瘦素共孵育，A549細胞VEGF蛋白表達水平與對照組相比明顯降低( P < 0.05）。
　　 5.相關性分析結(jié)果：瘦素與瘦素受體表達無明顯相關，瘦素和VEGF的表達呈正相關（r=0.675, P <0.05）；在瘦素80ng/ml、160ng/ml濃度組中，P-ERK1/2染色灰度比值分別為0.543±0.042、0.759±0.039；VEGF染色灰度比值分別為0.654±0.024、

8、0.862±0.094；統(tǒng)計學分析表明P-ERK1/2和VEGF染色灰度比值之間具有明顯相關性 (r=0.694，P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.瘦素、瘦素受體、VEGF在肺癌組織中均高表達，且其表達與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關，提示瘦素，瘦素受體與VEGF可能參與肺癌發(fā)生發(fā)展中的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。
　　 2.A549細胞上有瘦素受體表達，與瘦素結(jié)合，上調(diào)VEGF的表達促進肺癌血管生成并促進A549