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1、目的：探討VEGF在腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及腫瘤血管生成中的作用及其可能的分子機(jī)制。
方法：將本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建好的以綠色熒光蛋白(GFP)為報(bào)告基因的重組表達(dá)質(zhì)粒(pIRES2-VEGF-GFP、pIRES2-GFP和pSUPER-VEGF-GFP)擴(kuò)增后，通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染Lewis肺癌細(xì)胞株；熒光顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞GFP蛋白的表達(dá)狀態(tài)；MTT法觀(guān)察陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染空載體組、轉(zhuǎn)染重組基因組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周
2、期的變化；western-blot法檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后VEGF蛋白表達(dá)量的變化以及對(duì)COX-2、MMP2、MMP9等蛋白表達(dá)的影響。
結(jié)果：轉(zhuǎn)染組均可見(jiàn)穩(wěn)定的綠色熒光蛋白表達(dá)，表明轉(zhuǎn)染成功；過(guò)表達(dá)VEGF組和空白對(duì)照細(xì)胞組生長(zhǎng)率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，干擾組細(xì)胞生長(zhǎng)率則下降。與空白對(duì)照組(29.1[％])相比，過(guò)表達(dá)VEGF組中更多的細(xì)胞進(jìn)入了S期(45.3[％])；干擾VEGF表達(dá)后，細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期的比率達(dá)56.9[％
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