白血病細(xì)胞COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF基因表達(dá)與白血病患者血清COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF測(cè)定及其意義.pdf

1、本研究通過檢測(cè)白血病細(xì)胞COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF基因表達(dá)與白血病患者血清COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF水平的變化情況，分析檢測(cè)指標(biāo)在白血病的臨床治療中的指導(dǎo)意義，探討白血病的發(fā)生發(fā)展與血管生成的關(guān)系。
　　第一部分:COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF在急性白血病的表達(dá)及其意義
　　目的:
　　檢測(cè)不同類型急性白血病(AL)患者在不同時(shí)間段的COX-2、bFGF、TGFβ1、VEGF

2、等指標(biāo)的變化情況，分析各檢測(cè)指標(biāo)在AL的診斷、治療及預(yù)后判斷中的臨床意義。
　　方法:
　　以在安康市中心醫(yī)院就診的90例AL患者為研究對(duì)象，以該院體檢中心健康體檢者40例為正常對(duì)照，采用ELISA方法檢測(cè)血清COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF的含量，并對(duì)AL患者進(jìn)行治療前、后兩個(gè)不同階段的動(dòng)態(tài)檢測(cè);對(duì)于AL患者，采用骨髓涂片在顯微鏡下按常規(guī)分類計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，計(jì)算原始加幼稚細(xì)胞比例的方法進(jìn)行診斷。
　　

3、結(jié)果:
　　1.初診時(shí)，AL組的血清COX-2含量出現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)，與正常對(duì)照組相較，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，t/x2=6.082)。
　　2.初診時(shí)，AL組的血清bFGF含量出現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)，與正常對(duì)照組相較，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，t/x2=820.000)。
　　3.AL組初診時(shí)血清TGFβ1含量明顯減低，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，t/x2=860.

4、000)。
　　4.初診時(shí)，AL組的血清VEGF含量出現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)，與正常對(duì)照組相較，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，t/x2=4133.000)。
　　5.治療前AML組血清bFGF、COX2、VEGF及TGFβ1水平與ALL組患者比較，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P=0.586，x2=1077.000;P=0.646，x2=2906.500;P=0.986, x2=1135.500; P=0.729 x2=2

5、919.000)。
　　6.患者接受2至3個(gè)療程的治療后，達(dá)到完全緩解(CR)時(shí)，患者血清TGFβ1含量逐漸恢復(fù)到正常數(shù)值，與正常對(duì)照組相較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.895，x2=3774.000)。
　　結(jié)論:
　　研究表明，促血管生成因子COX-2、VEGF及bFGF在急性白血病患者血清中含量顯著增加，化療后完全緩解組患者血清COX-2、VEGF及bFGF含量顯著下降，而血清TGFβ1水平在急性白血病患者血清中含

6、量明顯減低，而化療后完全緩解組患者血清TGFβ1含量顯著升高，提示血管生成可能在急性白血病的發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用。因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)AL患者血清COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF水平，可作為急性白血病病情進(jìn)展的重要參考指標(biāo)。
　　第二部分:COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF在慢性粒細(xì)胞白血病的表達(dá)及其意義
　　目的:
　　檢測(cè)不同分期慢性粒細(xì)胞白血病(CML)患者不同發(fā)展階段血清COX-2、bFGF、T

7、GFβ1及VEGF的變化，對(duì)它們?cè)贑ML的診治和術(shù)后干預(yù)中的臨床意義進(jìn)行探討。
　　方法:
　　以在安康市中心醫(yī)院就診的50例初診CML患者為研究對(duì)象，以該院體檢中心健康體檢者40例為正常對(duì)照，采用ELISA方法檢測(cè)血清COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF的含量，并對(duì)CML患者進(jìn)行治療前、后兩個(gè)不同階段的動(dòng)態(tài)檢測(cè);對(duì)于AL患者，采用骨髓涂片在顯微鏡下按常規(guī)分類計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，計(jì)算原始加幼稚細(xì)胞比例的方法進(jìn)行診斷。

8、
　　結(jié)果:
　　1.初診時(shí)，CML組各期患者的血清COX-2含量顯著升高，與正常對(duì)照組比較，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，t/x2=34.862)。
　　2.初診時(shí)，CML組各期患者的血清bFGF含量顯著升高，與正常對(duì)照組比較，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P＜0.001，t/x2=820.000)。
　　3.CML組各期初診時(shí)血清TGFβ1含量明顯減低，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0

9、01，t/x2=1289.000);
　　4.初診時(shí)，CML組各期患者的血清VEGF含量顯著升高，與正常對(duì)照組比較，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，t/x2=1402.000)。
　　5.治療前CML組急變期患者血清bFGF、COX2及VEGF水平較慢性期患者增高，而TGFβ1水平減低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P＜0.001，t/x2=-6.974;P＜0.001,t/x2=485.000;P＜0.001,t/x

10、2=465.000; P＜0.001,t/x2=55.000));
　　6.治療前CML組加速期患者血清bFGF、COX2及VEGF水平較慢性期患者增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而TGFβ1水平減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為P＜0.001,t/x2=-6.117; P＜0.001,t/x2=575.000; P＜0.001,t/x2=445.000; P＜0.001,t/x2=65.000)。
　　7.經(jīng)過甲磺酸伊

11、馬替尼治療后，達(dá)到完全緩解（包括完全血液學(xué)緩解、完全遺傳學(xué)緩解及完全分子學(xué)緩解）(CR)時(shí)，血清bFGF、COX2及VEGF含量明顯下降，而TGFβ1含量基本恢復(fù)到正常水平，與正常對(duì)照組相較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P=0.950，t/x2=-0.063; P=0.983，t/x2=1518.000; P=0.584，t/x2=1468.500; P=0.742,t/x2=1299.000)。
　　結(jié)論:
　　CML患者初

12、診時(shí)存在COX-2、VEGF及bFGF的高表達(dá)，TGFβ1在CML初診時(shí)存在低表達(dá)，經(jīng)過甲磺酸伊馬替尼治療后，達(dá)到完全緩解時(shí)，血清COX-2、VEGF、bFGF及TGFβ1含量基本恢復(fù)正常，提示與CML的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。根據(jù)以上研究，說明動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CML患者血清COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF水平，可作為CML病情進(jìn)展的重要參考指標(biāo)。
　　第三部分:白藜蘆醇對(duì)K562細(xì)胞COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF基因

13、表達(dá)的影響
　　目的:
　　探討COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF對(duì)人白血病細(xì)胞增殖的影響機(jī)制。
　　方法:
　　采用不同濃度白藜蘆醇(Res)及伊馬替尼(IM)對(duì)K562細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，通過MTT法、臺(tái)盼藍(lán)染色、Hoechst33258染色及流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況。采用熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)其給藥后COX-2、bFGF、TGFβ1及VEGF的變化。
　　結(jié)果:
　　1

14、、細(xì)胞抑制率隨白藜蘆醇及伊馬替尼藥物濃度的增高而呈上升趨勢(shì)，各組間相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與單獨(dú)使用白藜蘆醇或者伊馬替尼相比，細(xì)胞增殖的抑制率明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中200μmol/mL白藜蘆醇+200μmol/L伊馬替尼組細(xì)胞的抑制率最高;隨著時(shí)間的延長,白藜蘆醇與伊馬替尼聯(lián)合作用組細(xì)胞的增殖抑制作用明顯增高，且當(dāng)作用72h時(shí)細(xì)胞的增殖抑制作用最高。
　　2、臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩種藥物聯(lián)

15、合運(yùn)用后對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。結(jié)果表明，各聯(lián)合用藥濃度組對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞毒作用均高于單用白藜蘆醇組和伊馬替尼組，且當(dāng)用200μmol/ml白藜蘆醇+0.2μmol/L伊馬替尼作用K562細(xì)胞時(shí)細(xì)胞的凋亡率最高;隨著時(shí)間的延長，白藜蘆醇與伊馬替尼聯(lián)合作用后使細(xì)胞的凋亡率明顯增高，且當(dāng)作用72 h時(shí)細(xì)胞凋亡率為最高。
　　3、采用伊馬替尼及白藜蘆醇對(duì)CML細(xì)胞株caspase-3進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，隨著白藜蘆醇或伊馬替尼濃度升高，

16、其caspase-3活性逐漸增強(qiáng)。
　　4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示單用白藜蘆醇及單用伊馬替尼對(duì)人白血病細(xì)胞K562均具有凋亡作用，而隨著白藜蘆醇濃度的增加，K562細(xì)胞的凋亡率逐漸增高;隨著伊馬替尼濃度的增加，K562細(xì)胞的凋亡率逐漸上升。
　　5、Hoechst33258染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)顯示單用白藜蘆醇及單用伊馬替尼對(duì)人白血病細(xì)胞K562均具有凋亡作用，而隨著白藜蘆醇濃度的增加，K562細(xì)胞的凋亡率逐漸增高;隨著伊馬替尼濃度的增加

17、，K562細(xì)胞的凋亡率逐漸上升。
　　6.PCR及Western blot結(jié)果顯示，相較于對(duì)照組，0.2μmol/L伊馬替尼組的COX-2、bFGF及VEGF的表達(dá)量明顯降低，而TGFβ1 mRNA的表達(dá)均顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而用200μmol/mL白藜蘆醇+0.2μmol/L伊馬替尼聯(lián)合作用于K562細(xì)胞后，細(xì)胞中TGFβ1 mRNA的表達(dá)明顯增高，而COX-2、bFGF及VEGF mRNA的表達(dá)均顯著