HPPCn促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移的作用和機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)流行性廣、病程短、病死率高,2010年統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示在我國每年有約34.4萬人死于肝細(xì)胞癌,占全球肝癌死亡人數(shù)55％。肝癌浸潤和轉(zhuǎn)移特性是影響腫瘤患者生存和預(yù)后的關(guān)鍵因素。因此,深入研究肝癌轉(zhuǎn)移機(jī)制并發(fā)展新的治療策略是關(guān)系人類健康的重大科學(xué)問題。
　　HPPCn(Hepatopoietin Cn, HPPCn)是本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的一種新型肝細(xì)胞刺激因子,能夠促進(jìn)肝臟實(shí)質(zhì)

2、細(xì)胞的DNA合成和細(xì)胞分裂,并能夠促進(jìn)70%肝切除小鼠的肝臟再生。除此以外,研究證實(shí)HPPCn的表達(dá)和活性與肝癌的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。HPPCn能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖及克隆形成,并能通過激活MAPK,SPK,Stat3等信號通路,上調(diào)Mcl-1的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡。干涉肝癌細(xì)胞中的HPPCn能夠抑制肝癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)TSA,阿霉素,Sorafinib等化療藥物誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡。利用肝臟特異轉(zhuǎn)基因小鼠的肝癌誘發(fā)模型評價了HPPC

3、n在肝臟中高表達(dá)對腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移的影響,發(fā)現(xiàn)HPPCn在肝臟中特異高表達(dá)對DEN誘導(dǎo)肝癌的發(fā)生率、腫瘤大小、數(shù)量及腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)無顯著影響,但在誘導(dǎo)早期能增加原癌基因c-myc的表達(dá),并明顯增加肝癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移率。肝癌浸潤和轉(zhuǎn)移特性是影響腫瘤患者生存和預(yù)后的關(guān)鍵因素,因此進(jìn)一步探討HPPCn在肝癌轉(zhuǎn)移過程中的作用和機(jī)制,對于深入揭示肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,發(fā)掘新的肝癌治療靶標(biāo)具有重要意義。
　　在本研究中,首先檢測不同轉(zhuǎn)移能力肝癌細(xì)

4、胞中HPPCn及 EMT標(biāo)志物的表達(dá)情況。結(jié)果顯示HPPCn的含量與肝癌細(xì)胞的遷移有關(guān)。重組人HPPCn蛋白(rhHPPCn)可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移并促進(jìn)發(fā)生不同程度的EMT轉(zhuǎn)化。之后構(gòu)建了攜帶HPPCn干涉序列載體,以人肝癌細(xì)胞系HepG2為研究對象篩選出穩(wěn)定干涉HPPCn的肝癌細(xì)胞株(si-HPPCn)及陰性對照株(nc-HPPCn)。發(fā)現(xiàn)干涉HPPCn后能明顯抑制肝癌細(xì)胞的EMT轉(zhuǎn)化并使HepG2細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。采用信號通路阻斷劑

5、、細(xì)胞免疫組化、WB及分離核蛋白的方法初步探討了HPPCn促進(jìn)肝癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制。前期的臨床標(biāo)本研究顯示,HPPCn與肝癌患者的血管浸潤有關(guān)。所以以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系HUVEC為研究對象,考察rhHPPCn對其血管形成的影響。發(fā)現(xiàn)rhHPPCn可明顯促進(jìn)HUVEC遷移及血管形成。最后,用Ad-SPK腺病毒感染肝癌細(xì)胞LM-3使其SPK過表達(dá),WB檢測SPK表達(dá)及激活情況;Transwell、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測肝癌細(xì)胞遷移情況。建立SPK

6、過表達(dá)裸鼠模型及HPPCn過表達(dá)裸鼠模型,結(jié)果顯示Ad-SPK及rhHPPCn均促進(jìn)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移,鞘氨醇激酶通過調(diào)控血管發(fā)生促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移。
　　腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜而連續(xù)的過程,包括腫瘤細(xì)胞在原發(fā)部位的生長、侵及周圍正常組織、穿透基底膜、侵及脈管進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)并存活下來到達(dá)遠(yuǎn)隔部位,侵出脈管并在新的部位形成轉(zhuǎn)移灶。肝癌浸潤和轉(zhuǎn)移特性是影響腫瘤患者生存和預(yù)后的關(guān)鍵因素,因此進(jìn)一步探索并揭示肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,尋找新的有效的治療靶點(diǎn)。