GP73在肝癌細胞侵襲和遷移過程中的作用.pdf

1、目的：探討RNA干擾技術（RNAi）沉默人肝癌細胞中高爾基體蛋白73(GP73)基因表達后，對其侵襲和遷移能力的影響，并探索其相關機制，為將該基因應用于肝癌的基因靶向治療提供理論依據(jù)。
　　方法：⑴根據(jù)GP73序列和 siRNA的設計原則，設計合成一條靶向 GP73基因的小干擾RNA（siRNA），應用陽離子脂質(zhì)體法將設計合成的GP73 siRNA瞬時轉(zhuǎn)染HepG2和SMMC7721細胞。采用實時定量PCR（qRT-PCR）和EL

2、ISA法檢測轉(zhuǎn)染后2株細胞GP73 mRNA和蛋白表達水平變化；⑵按最佳轉(zhuǎn)染條件沉默 GP73基因的表達后，采用 Transwell侵襲實驗觀察 HepG2和 SMMC7721細胞侵襲能力改變，采用Transwell遷移實驗以及劃痕愈合實驗分別觀察其縱向和橫向遷移能力改變；⑶qRT-PCR和Western blot法檢測侵襲相關因子及通路蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、鋅指轉(zhuǎn)錄因子(

3、Snail)、波形蛋白(Vimentin）的表達情況，探索沉默GP73基因后影響細胞侵襲和遷移能力的潛在機制。
　　結果：①GP73 siRNA能顯著降低HepG2和SMMC7721細胞中GP73 mRNA和蛋白的表達；②GP73 siRNA沉默GP73基因的表達后，HepG2和SMMC7721細胞的侵襲和遷移能力均較對照組明顯降低；③有效沉默 GP73后，qRT-PCR結果顯示MMP-2、MMP-9、Snail和Vimentin

4、的mRNA表達水平有所降低，而E-cadherin mRNA表達水平有所升高；相應地，Western blot結果也顯示MMP-2、MMP-9、Snail和Vimentin的蛋白表達水平有所降低，但E-cadherin的蛋白表達水平有所升高。
　　結論：⑴GP73 siRNA可明顯降低GP73基因在HepG2和SMMC7721細胞中的表達水平；⑵GP73 siRNA有效沉默GP73基因表達后，HepG2和SMMC7721細胞的侵襲