乙肝病毒X蛋白通過YAP促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、南開大學(xué)碩士學(xué)位論文乙肝病毒X蛋白通過YAP促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用及其分子機(jī)制的研究姓名：張俊萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張曉東；葉麗虹201205摘要中，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測結(jié)果顯示，HBx能顯著增強(qiáng)YAP基因的啟動子活性。為了進(jìn)一步證實(shí)HBx對YAP啟動子活性上調(diào)作用，在HepG2X(或H7402X)中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HBx的干擾質(zhì)粒pSilencer30HBx后，YAP的啟動子活性明顯受到抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴

2、性。為了篩選YAP的啟動子核心區(qū)，將全長的啟動子隨機(jī)分為3段：P604／115(YAP720)，P232／115(YAP348)，P62／115(YAP178)，并且將這三個(gè)片段全部克隆到熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3Basic中，并分別命名為pGL3720，pGL3348和pGL3178。然后，分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HepG2(或H7402)，報(bào)告基因結(jié)果顯示pGL3348的活性最強(qiáng)，提示P232／115片段的基因序列為YAP啟動子核心

3、區(qū)。第三部分：HBx通過YAP促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖將YAP的siRNA干擾片段瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到人肝癌細(xì)胞系HepG2X(或H7402X)中，應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)檢測YAP對肝癌細(xì)胞增殖作用的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染YAPsiRNA的肝癌細(xì)胞與對照組相比，細(xì)胞增殖明顯受到抑制，表明YAP有促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，HBx通過上調(diào)YAP的表達(dá)水平促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。本研究為進(jìn)一步揭示HBx的致癌分子機(jī)理提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對