乙肝病毒X蛋白及其截短體對小鼠胎肝前體細胞增殖的影響.pdf

1、背景和目的：乙肝病毒X蛋白（HBx）是乙型肝炎病毒（HBV）相關性肝細胞肝癌（HCC）的發(fā)生、發(fā)展重要原因。HBx蛋白的羧基末端對維持HBV的復制發(fā)揮著重要的作用。同時，HBx能夠促進小鼠肝臟前體細胞（HPCs）的增殖及成瘤性，然而，HBx蛋白羧基末端對維持HBx促進小鼠胎肝前體細胞（FHPCs）增殖及惡性潛能是否發(fā)揮著必不可少的作用，仍不得而知，本研究將重點闡述HBx蛋白羧基末端對FHPCs增殖的影響。
　　方法：差數(shù)離心聯(lián)合密

2、度梯度離心法篩選肝臟前體細胞，經(jīng)細胞免疫熒光鑒定肝臟前體細胞中CD133, EPCAM, CD49f及CK19表面標記物的表達。添加DMSO，HGF后,過碘酸雪夫氏染色、細胞免疫熒光、流式細胞術檢測肝臟前體細胞向肝細胞和膽管上皮細胞分化。轉染HBx蛋白后，PCR檢測細胞轉染效率，并觀察HBx轉染后肝臟前體細胞形態(tài)學、增殖能力及惡性潛能的差異性。
　　結果：
　?。?）本研究中運用具有雙向分化潛能的 EPCAM+, CD133

3、+和CD49f+的FHPCs，這些細胞在促進分化的條件下培養(yǎng)能夠分化為肝細胞和膽管上皮細胞。
　?。?）相比于單層貼壁生長，成球的FHPCs增殖更為迅速。
　?。?）成球的FHPCs接種于軟瓊脂中相對于鼠尾膠原上，更能夠維持干細胞的外形和特性。
　?。?）HBx蛋白的羧基末端能夠促進FHPCs增殖，但是不能夠維持肝臟腫瘤干細胞樣的球樣的特性。
　　結論：這些結果進一步理解HBx誘導的FHPCs惡性潛能，同時將有助