乙肝病毒X蛋白及其截短體對(duì)小鼠胎肝前體細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景和目的：乙肝病毒X蛋白（HBx）是乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌（HCC）的發(fā)生、發(fā)展重要原因。HBx蛋白的羧基末端對(duì)維持HBV的復(fù)制發(fā)揮著重要的作用。同時(shí)，HBx能夠促進(jìn)小鼠肝臟前體細(xì)胞（HPCs）的增殖及成瘤性，然而，HBx蛋白羧基末端對(duì)維持HBx促進(jìn)小鼠胎肝前體細(xì)胞（FHPCs）增殖及惡性潛能是否發(fā)揮著必不可少的作用，仍不得而知，本研究將重點(diǎn)闡述HBx蛋白羧基末端對(duì)FHPCs增殖的影響。
　　方法：差數(shù)離心聯(lián)合密

2、度梯度離心法篩選肝臟前體細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞免疫熒光鑒定肝臟前體細(xì)胞中CD133, EPCAM, CD49f及CK19表面標(biāo)記物的表達(dá)。添加DMSO，HGF后,過(guò)碘酸雪夫氏染色、細(xì)胞免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝臟前體細(xì)胞向肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞分化。轉(zhuǎn)染HBx蛋白后，PCR檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，并觀察HBx轉(zhuǎn)染后肝臟前體細(xì)胞形態(tài)學(xué)、增殖能力及惡性潛能的差異性。
　　結(jié)果：
　?。?）本研究中運(yùn)用具有雙向分化潛能的 EPCAM+, CD133

3、+和CD49f+的FHPCs，這些細(xì)胞在促進(jìn)分化的條件下培養(yǎng)能夠分化為肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞。
　?。?）相比于單層貼壁生長(zhǎng)，成球的FHPCs增殖更為迅速。
　?。?）成球的FHPCs接種于軟瓊脂中相對(duì)于鼠尾膠原上，更能夠維持干細(xì)胞的外形和特性。
　?。?）HBx蛋白的羧基末端能夠促進(jìn)FHPCs增殖，但是不能夠維持肝臟腫瘤干細(xì)胞樣的球樣的特性。
　　結(jié)論：這些結(jié)果進(jìn)一步理解HBx誘導(dǎo)的FHPCs惡性潛能，同時(shí)將有助