乙肝病毒X蛋白及其截短體與損傷DNA結合蛋白1在HBV復制中的作用.pdf

1、背景：乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein，HBx)與損傷DNA結合蛋白1(damage-specific DNA binding protein1，DDB1)在乙肝病毒(Hepatitis B virus，HBV)復制中發(fā)揮了重要作用。HBV基因組整合到宿主基因組過程中，HBx蛋白常常發(fā)生斷裂不全，轉錄為HBx蛋白的截短體，既往多項研究表明HBx蛋白截短體對HBV的復制產生了一定的影響，并且不同截短長

2、度、不同截短部位的截短體對HBV的復制產生的影響也不同。但是，HBx蛋白截短體是否通過影響DDB1水平來影響HBV復制至今尚無詳細報道。
　　目的：我們的研究將進一步探討HBx蛋白及其兩個截短體(HBx1-101，HBx43-154)與DDB1在HBV復制中的作用。
　　方法：使用質粒瞬時轉染HepG2細胞后，分別提取轉染后72h細胞總RNA和細胞總蛋白，通過逆轉錄實時定量PCR和Western blot分析方法分別在DDB

3、1基因的mRNA和蛋白水平觀察HBx蛋白及其截短體對DDB1蛋白的影響。并通過質粒共轉染瞬時轉染HepG2細胞后，提取轉染72h后各轉染組細胞胞漿DNA，收集各轉染組細胞的培養(yǎng)上清液，通過實時定量PCR及ELISA方法檢測各組細胞HBV復制及病毒標志物表達水平，從而觀察HBx蛋白及其兩個截短體與DDB1對HBV復制的影響。
　　結果：在有HBV復制的HepG2細胞中，轉染了HBx C-端截短體HBx1-101的細胞中DDB1蛋白的

4、表達水平明顯下降，且不能使缺失HBx蛋白的HepG2細胞中HBV的復制及病毒標志物表達恢復到野生型水平；而轉染N-端截短體HBx43-154的細胞中DDB1蛋白表達水平與轉染HBx的對照組相比無明顯變化，且能使缺失HBx蛋白的HepG2細胞中HBV的復制及病毒標志物表達恢復到野生型水平。并且各轉染組DDB1蛋白水平變化與HBV復制水平相平行，即DDB1蛋白水平的降低，使得HBV復制水平也相應降低。
　　結論：C-端53個氨基酸及D