乙肝病毒X基因轉(zhuǎn)化人肝細(xì)胞裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的： 1.試圖在裸鼠體內(nèi)證實(shí)HBV X基因能否轉(zhuǎn)化人肝細(xì)胞形成移植瘤。 2.移植瘤的組織形態(tài)學(xué)觀察。 3.初步研究裸鼠成瘤的可能機(jī)制。 方法： 1.利用已成功構(gòu)建的高表達(dá)HBX基因的pCMVX/QSG7701細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)組、以pRcCMV2/QSG7701細(xì)胞株和QSG7701細(xì)胞株為對(duì)照組接種于裸鼠皮下，觀察裸鼠能否成瘤。 2.觀察裸鼠的一般情況以及移植瘤的大小、質(zhì)地及周?chē)M織轉(zhuǎn)移情

2、況等。第5周處死裸鼠，摘下移植瘤。 3.HE染色、顯微鏡檢研究移植瘤的組織形態(tài)學(xué)特征。 4.RT-PCR方法研究移植瘤突變型P53基因和C-Myc基因在mRNA水平的表達(dá)情況。 5.免疫組化方法研究移植瘤的突變型P53蛋白、C-Myc蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.接種了pCMVX/QSG7701細(xì)胞株的裸鼠自接種日起至接種后三周活動(dòng)度、進(jìn)食無(wú)異常，體重逐漸增加，但自第四周起活動(dòng)度減少、進(jìn)食量下降、

3、體重?zé)o明顯增加。而接種了pRcCMV2/QSG7701細(xì)胞株和QSG7701細(xì)胞株的裸鼠精神、進(jìn)食始終未出現(xiàn)異常，體重逐漸增加。 2.接種pCMVX/QSG7701細(xì)胞株的裸鼠在第二周開(kāi)始出現(xiàn)移植瘤生長(zhǎng)，成瘤率100％，周?chē)鞴俸徒M織未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶。對(duì)照組至接種后第35天無(wú)移植瘤生長(zhǎng)。 3.HE染色證實(shí)移植瘤為肝細(xì)胞癌組織。 4.移植瘤、pCMVX/QSG77細(xì)胞、pRcCMV2/QSG7701細(xì)胞和QSG7701

4、細(xì)胞中均有突變型P53 mRNA及突變型P53蛋白的表達(dá)。移植瘤和pCMVX/QSG7701細(xì)胞中突變型P53 mRNA及突變型P53蛋白的表達(dá)量較pReCMV2/QSG7701細(xì)胞、QSG7701細(xì)胞明顯增高。 5.移植瘤、pCMVX/QSG7701細(xì)胞、pRcCMV2/QSG7701細(xì)胞和QSG7701細(xì)胞中均有C-Myc mRNA及C.Myc蛋白的表達(dá)。移植瘤和pCMVX/QSG7701細(xì)胞中C-Myc mRNA及C-My