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文檔簡介
1、目的:本實驗主要觀察HSP27對THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的影響,并探討其相關(guān)機制。
方法:將THP-1細(xì)胞中加入佛波酯,同時用ox-LDL孵育使之轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞,并加入HSP27(不同濃度)以及siRNA即小分子干擾RNA等因素處理后,采用Western blot和半定量RT-PCR檢測ABCA1蛋白質(zhì)的表達(dá)和mRNA表達(dá),采用高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)總膽固
2、醇,游離膽固醇和膽固醇酯含量,使用液體閃爍計法檢測細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出。以PI3K抑制劑或PKCζ阻斷劑或SP1抑制劑對HSP27作用下的細(xì)胞共處理24小時,觀察對ABCA1表達(dá)的影響。不同形式HSP27處理THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞24h,Western blot檢測HSP27對PKCζ和SP1磷酸化水平的影響。
結(jié)果: HSP27上調(diào)ABCA1的表達(dá),增加細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,從而減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積;3D HSP27增加PI3
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