ABCG1啟動(dòng)子多態(tài)性對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響及其與冠心病的相關(guān)性.pdf

1、【研究背景】：
　　冠心?。╟oronary artery disease, CAD）是危害人類健康的主要疾病，其發(fā)病率和死亡率居所有疾病之首。CAD的發(fā)生主要是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化所致，受遺傳因素和環(huán)境因素影響，其中遺傳因素起主導(dǎo)作用。高膽固醇是CAD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一，其在細(xì)胞中的蓄積與膽固醇的細(xì)胞代謝調(diào)控有關(guān)。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1（ ATP-binding cassette transporter G1, ABCG1）

2、是三磷酸結(jié)合盒（ATP-binding cassette, ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)體超家族中的成員之一，參與細(xì)胞內(nèi)膽固醇和磷脂向高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程，從而避免膽固醇嚴(yán)重沉積于外周細(xì)胞，在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)（ reverse cholesterol transport, RCT）中起重要作用。既往研究顯示ABCG1基因內(nèi)或啟動(dòng)子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（si

3、ngle nucleotide polymorphisms, SNPs）與CAD的易感性有關(guān)。啟動(dòng)子區(qū)的SNPs能導(dǎo)致ABCG1的表達(dá)水平改變，從而導(dǎo)致個(gè)體對(duì)CAD易感性的差異，致使啟動(dòng)子活性下降的SNPs降低CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，其主要機(jī)制可能是誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的凋亡所致。然而ABCG1存在多個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)（promoter region A, B, C等），對(duì)于啟動(dòng)子A中的SNPs是否與CAD的易感性有關(guān)也有研究報(bào)道，且與早發(fā)心肌梗死和冠脈病

4、變血管數(shù)相關(guān)。但rs1378577是否影響ABCG1啟動(dòng)子活性，以及在啟動(dòng)子A區(qū)是否存在其它與CAD易感性有關(guān)的SNPs尚不清楚，本研究擬通過(guò)Sanger測(cè)序和雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)鑒定ABCG1啟動(dòng)子A區(qū)與CAD易感性相關(guān)的SNPs和單倍型，進(jìn)一步揭示ABCG1參與CAD發(fā)生發(fā)展的分子遺傳機(jī)制。
　　【研究目的】：
　　1.探討ABCG1基因啟動(dòng)子A近轉(zhuǎn)錄啟始位點(diǎn)區(qū)域的多態(tài)性對(duì)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　2.探討 AB

5、CG1啟動(dòng)子 A近轉(zhuǎn)錄啟始位點(diǎn)區(qū)域的多態(tài)性與中國(guó)南方漢族人群CAD易感性的關(guān)系。
　　【研究方法】：
　　1.采用病例-對(duì)照研究，收集217例經(jīng)冠脈造影證實(shí)的CAD患者和142例對(duì)照者的血樣，提取基因組DNA；同時(shí)收集研究對(duì)象的詳細(xì)臨床資料。
　　2.對(duì)ABCG1啟動(dòng)子A轉(zhuǎn)錄啟始位點(diǎn)上游約1000 bp核苷酸序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增和Sanger法測(cè)序，計(jì)算SNPs位點(diǎn)基因型和等位基因型在各組中的頻率，并對(duì)序列進(jìn)行進(jìn)化分析，

6、分析SNPs組成的單倍型及單倍型頻率分布。
　　3.構(gòu)建ABCG1的組成型和突變型啟動(dòng)子單倍型螢光素酶報(bào)告基因載體，轉(zhuǎn)染Hela和HCAEC，利用雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)不同單倍型的螢光素酶活性。
　　4.統(tǒng)計(jì)分析：比較分析組或亞組間SNPs等位基因頻率、基因型頻率及其所形成的單倍型頻率差異。
　　【結(jié)果】：
　　1.在ABCG1基因啟動(dòng)子A轉(zhuǎn)錄啟始位點(diǎn)上游約1000 bp序列中發(fā)現(xiàn)3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)[-384（A

7、/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]，可形成ACG、GAT和GCG3種單倍型，3個(gè)SNPs間強(qiáng)連鎖不平衡，Tajima’s D=2.655（P＜0.001）。
　　2.三種組成型單倍型（ACG、GAT和 GCG）的轉(zhuǎn)錄活性無(wú)顯著性差異。將GAT進(jìn)行點(diǎn)突變，得到兩種突變單倍型GAG和GCT，GAG單倍型的轉(zhuǎn)錄活性較組成型單倍型的轉(zhuǎn)錄活性升高約2倍，而GCT單倍型的轉(zhuǎn)錄活性與組成型單倍型無(wú)顯著差異。
　　3. ABC

8、G1啟動(dòng)子A區(qū)SNP位點(diǎn)[-384（A/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]的等位基因頻率、基因型頻率及其形成的單倍型的頻率在CAD和對(duì)照組中分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與早發(fā) CAD及 CAD病變數(shù)量的嚴(yán)重程度亦無(wú)顯著相關(guān)性。
　　【結(jié)論】：
　　1. ABCG1啟動(dòng)子A區(qū)的3個(gè)SNPs[-384（A/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]形成的三種組成型單倍型的啟動(dòng)子活性沒(méi)有顯著差異。
　　2. ABCG1