DDAH2基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分、非對稱性二甲基精氨酸對內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激影響及L-精氨酸的干預(yù)作用
　　 目的：研究非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激影響及觀測L-精氨酸對內(nèi)皮細(xì)胞的保護作用。
　　 方法：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞隨機4組：對照組，ADMA組，ADMA+L-精氨酸組，L-精氨酸組。應(yīng)用熒光染料檢測細(xì)胞活性氧的產(chǎn)生。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)檢測還原型輔酶Ⅱ氧化酶亞基mRNA變化。
　　 結(jié)果：①與對

2、照組相比，ADMA組(10μg/mL)處理24 h后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)活性氧生成量顯著高于對照組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)活性氧水平[(4.5±0.8)vs(1.64±0.3)，P＜0.05，n=3]。而預(yù)先給予L-精氨酸(1mmol/L)能顯著抑制ADMA誘導(dǎo)的ROS生成的增加，與ADMA組相比，活性氧下降60％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義[(2.25±0.5)vs(4.5±0.8)，P＜0.01，n=3]。②與對照組相比，ADMA組還原型輔酶Ⅱ氧化酶

3、p22phox亞基、gp91phox亞基mRNA的表達(dá)明顯上調(diào)。L-精氨酸能阻斷這些基因的上調(diào)。
　　 第二部分、二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性
　　 目的：研究中國人群二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶(dimethylarginine dimethylamino acidHydrolase，DDAH2)基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的關(guān)系。
　　 方法：從山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院選取冠心病患者1

4、65例和匹配的對照組192例。并記錄所有研究對象的病史、體格檢查等臨床資料及其它流行病學(xué)資料，采用酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測量病例組和對照組中血漿非對稱二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)的濃度。采取聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和限制性酶切片斷長度多態(tài)性分析方法(polymerase chain reaction-restriction f

5、ragment length polymorphism，PCR-RFLP)檢測各組DDAH2基因rs805305位點C/G的基因型并統(tǒng)計各組的基因型頻率。用連接酶檢測反應(yīng)(ligase detection reaction，LDR)-測序分型方法檢測各組基因rs2272592位點G/A的基因型并統(tǒng)計各組的基因型頻率。
　　 結(jié)果：冠心病組血漿ADMA水平顯著高于對照組。以顯型遺傳模式分析發(fā)現(xiàn)rs805305 G等位基因頻率在冠心

6、病組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義[86.7％vs81.3％，P＞0.05，OR值=0.667(0.374～1.187)]；rs2272592 A等位基因頻率在冠心病組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義[33.3％vs26.0％，P＞0.05，OR值=1.420(0.899～2.242)]。并在校正了年齡、性別、高血壓史、糖尿病史、甘油三脂和膽固醇等傳統(tǒng)危險因素的影響后，這種相關(guān)性依然不存在。
　　 結(jié)論：
　　 1.ADMA水