肺癌表觀遺傳的臨床基礎(chǔ)研究.pdf

1、肺癌是呼吸系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，NSCLC約占全部肺癌的80～85％。目前，肺癌的主要治療手段包括手術(shù)治療、放療、化療和靶向治療等，盡管近年來上述治療措施已取得長足進(jìn)步，但其復(fù)發(fā)率和病死率仍很高，總體療效差，主要原因在于其發(fā)病、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等相關(guān)機(jī)制尚不明確。肺癌起源于一系列遺傳和表觀遺傳的變化，DNA甲基化和miRNA是表觀遺傳修飾的主要機(jī)制，已成為胸外科的研究熱點(diǎn)之一。
　　 實(shí)驗(yàn)共分為兩個部分:第一部分，在腫瘤組織、癌旁組織

2、、正常組織中，評估hOGG1和HYAL1基因啟動子甲基化的表達(dá)差異，在NSCLC患者和良性對照患者外周血中，評估hOGG1及HYAL1基因啟動子甲基化的差異;第二部分，在NSCLC患者與良性對照患者外周血中，評估m(xù)iRNAs的表達(dá)差異能否用于NSCLC的早期診斷，評估外周血中miRNAs的表達(dá)差異能否用于預(yù)測早期肺癌的復(fù)發(fā)。
　　 第一部分
　　 肺癌組織及血漿中HYAL1與hOGG1基因啟動子甲基化的狀況與臨床意義

3、r>　　 目的:在腫瘤組織、癌旁組織、正常組織中，評估hOGG1和HYAL1基因啟動子甲基化的表達(dá)差異，在NSCLC患者和良性對照患者外周血中，評估hOGG1及HYAL1基因啟動子甲基化的差異;觀察hOGG1和HYAL1基因啟動予甲基化與NSCLC臨床病理因素的關(guān)系。
　　 方法:評估80例NSCLC肺癌組織，80例癌旁組織，以及20例肺良性病變組織中hOGG1及HYAL1基因啟動子甲基化差異，并分析肺癌組甲基化狀況與臨床病理

4、資料相關(guān)關(guān)系;評估80例NSCLC患者和20例肺良性病變患者外周血中hOGG1及HYAL1基因啟動子甲基化狀況;評估10例肺癌組織與相應(yīng)轉(zhuǎn)移縱隔淋巴結(jié)中hOGG1及HYAL1基因啟動子甲基化狀況。
　　 結(jié)果:肺癌組織中，HYAL1啟動子甲基化的陽性率明顯高于正常對照組(48.8％vs10％，p=0.002);癌旁組織中，HYAL1啟動子甲基化的陽性率高于正常對照組(32.5％ vs10％，p=0.045); NSCLC患者血漿

5、中HYAL1啟動子甲基化的陽性率顯著高于對照組血漿(40％ vs5％，p=0.003)。
　　 肺癌組織中，hOGG1啟動子甲基化的陽性率明顯高于正常對照組(52.5％vs15％，p=0.003);癌旁組織中，hOGG1啟動子甲基化的陽性率高于正常對照組，但兩者差異無顯著性(23.8％ vs15％，p=0.587); NSCLC患者血漿中hOGG1啟動子甲基化的陽性率顯著高于對照組血漿(42.5％ vs10％，p=0.007)。

6、
　　 惡性組肺癌組織中HYAL1和hOGG1啟動子甲基化率與患者的性別、年齡分組、腫瘤大小、病理類型、組織學(xué)分級、T分期均無明顯關(guān)系(P＞0.05)。肺癌組織中，Ⅲ期組HYAL1啟動子甲基化陽性率高于Ⅰ-Ⅱ期組(66.7％ vs39.6％，p=0.022);淋巴結(jié)陽性組HYAL1啟動子甲基化陽性率高于淋巴結(jié)陰性組(63.6％ vs38.3％，p=0.026)。肺癌組織中，Ⅲ期組hOGG1啟動子甲基化陽性率高于Ⅰ-Ⅱ期組(74.

7、1％vs41.5％，p=0.006);淋巴結(jié)陽性組hOGG1啟動子甲基化陽性率高于淋巴結(jié)陰性組(69.7％ vs40.4％, p=0.001)。
　　 惡性組血漿中HYAL1和hOGG1啟動子甲基化率與患者的性別、年齡分組、腫瘤大小、病理類型、組織學(xué)分級、T分期均無明顯關(guān)系(P＞0.05)。惡性組血漿中，Ⅲ期組HYAL1啟動子甲基化陽性率高于Ⅰ-Ⅱ期組(66.7％ vs26.4％，p=0.001);淋巴結(jié)陽性組HYAL1啟動子甲

8、基化陽性率高于淋巴結(jié)陰性組(60.6％ vs25.5％，p=0.002);惡性組血漿中Ⅲ期組hOGG1啟動子甲基化陽性率高于Ⅰ-Ⅱ期組(59.3％vs34.0％，p=0.030);淋巴結(jié)陽性組hOGG1啟動子甲基化陽性率高于淋巴結(jié)陰性組，但兩者差異無顯著性(54.5％ vs34.0％，p=0.068)。
　　 血漿中HYAL1啟動子甲基化陽性用于肺癌診斷的ROC曲線，AUC為0.675(95％的可信區(qū)間為56％-79％)。血漿中

9、hOGG1啟動子甲基化陽性用于肺癌診斷的ROC曲線，AUC為0.663(95％的可信區(qū)間為54.3％-78.2％)。血漿中hOGG1聯(lián)合HYAL1啟動子甲基化陽性用于肺癌診斷的ROC曲線，AUC為0.728(95％的可信區(qū)間為61.9％-83.8％)。
　　 10例肺癌組織與相應(yīng)轉(zhuǎn)移縱隔淋巴結(jié)比較顯示，二者之間HYAL1啟動子甲基化狀況存在差異4例，二者之間存在hOGG1啟動子甲基化狀況存在差異4例。
　　 結(jié)論:hOG

10、G1和HYAL1在NSCLC組織和血漿中存在啟動子高甲基化，肺癌組織中hOGG1和HYAL1的啟動子高甲基化與NSCLC病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示hOGG1和HYAL1的啟動子高甲基化可能參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。血漿hOGG1和HYAL1的檢測可用于NSCLC的輔助診斷。NSCLC腫瘤內(nèi)部可能存在腫瘤異質(zhì)性。
　　 第二部分
　　 血漿miR-155、miR-182和miR-21對早期非小細(xì)胞肺癌診斷價值

11、的研究
　　 目的:研究非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者與良性對照患者外周血中miRNAs的表達(dá)差異能否用于NSCLC的早期診斷，外周血中miRNAs的表達(dá)差異能否用于預(yù)測早期肺癌的復(fù)發(fā)。
　　 方法:采用實(shí)時熒光定量RT-PCR檢測血漿中9種miRNAs(miR-30d，miR-383, miR-223, miR-25, miR-21、miR-126、miR-210、miR-155、miR-182)的表達(dá)量，在20例NS

12、CLC患者和20例良性對照組中篩選出可能有診斷價值的miRNAs。在總計(jì)135例早期NSCLC和85例良性對照組中，評估m(xù)iR-21、miR-155以及miR-182的計(jì)算其診斷的ROC曲線;隨訪135例NSCLC患者3年，評估復(fù)發(fā)組與無復(fù)發(fā)組miRNAs表達(dá)差異。
　　 結(jié)果:NSCLC組血漿miR-21、miR-155以及miR-182的表達(dá)顯著高于良性對照組，在miR-21曲線下面積(the Areas under the

13、 ROC Curve，AUC)為0.805(95％的可信區(qū)間:0.749-0.861)，其最佳診斷臨界點(diǎn)，診斷敏感性68.1％，診斷特異性78.8％; miR-155曲線下面積為0.821（95％的可信區(qū)間:0.767-0.875），其最佳截?cái)帱c(diǎn)，診斷敏感性81.5％，診斷特異性69.4％; miR-182曲線下面積為0.745（95％的可信區(qū)間:0.681-0.809），其最佳截?cái)帱c(diǎn)，診斷敏感性55.6％，診斷特異性82.4％。將這3

14、種miRNAs聯(lián)合起來，可更明顯地將NSCLC組與良性對照組區(qū)分出來，AUC值為0.894（95％可信區(qū)間:0.862-0.936），其最佳截?cái)帱c(diǎn)，診斷敏感性為73.3％，診斷特異性為95.3％。復(fù)發(fā)組患者血漿miR-21、miR-155以及miR-182的表達(dá)顯著高于未復(fù)發(fā)組。
　　 結(jié)論:血漿miR-21、miR-155以及miR-182可用于NSCLC早期診斷，可以有助于與肺內(nèi)良性病變相鑒別。miR-21、miR-155以