遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異常的臨床及相關(guān)基礎(chǔ)研究.pdf

1、遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異常(DentinogenesisImperfectaDGI)是一種常見的人類牙本質(zhì)遺傳性疾病,主要局限于牙齒中胚層及牙乳頭發(fā)育異常的一類疾病,其發(fā)病率為1/10000-1/6000不等。Shields在1973年將牙本質(zhì)發(fā)育不全分為兩大類:牙本質(zhì)發(fā)育不全(DGI)及牙本質(zhì)發(fā)育不良(dentindysplasiaDD);5小類(3種牙本質(zhì)發(fā)育不全和2種牙本質(zhì)發(fā)育不良)。本實(shí)驗(yàn)主要研究為牙本質(zhì)發(fā)育不全I(xiàn)I型(DGI-II)

2、和牙本質(zhì)發(fā)育不良I型(DD-I)。
　　DGI-II型又稱遺傳性乳光牙(hereditaryopalescentdentin),是一種常染色體顯性遺傳疾病,外顯率幾乎為100％,發(fā)病率為1/6000-1/8000,乳恒牙均受累,男女患病人數(shù)相同?；颊吲R床特征只局限在牙齒發(fā)育異常,無骨骼發(fā)育異常等全身系統(tǒng)性疾病。患者牙齒呈琥珀色或黃褐色改變,牙釉質(zhì)剝脫,牙齒特別是恒牙列磨耗較重,牙冠短小。DD-I型發(fā)病率為1/100000,也是一種

3、常染色體顯性遺傳疾病,外顯率不足100%,臨床檢查顯示牙體形態(tài)及牙冠顏色無明顯異常,X線片檢查發(fā)現(xiàn)牙根短小,在非齲壞的牙齒下可見不明原因的根尖周陰影。
　　我國學(xué)者張于2001年首次將DGI-II致病基因確定為牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentinsialophosphoproteinDSPP)。然而目前沒有報(bào)道DSPP基因突變與DD-I型疾病有關(guān),但DSPP基因仍為DD-I型牙本質(zhì)發(fā)育不良的重要候選基因。目前報(bào)道已發(fā)現(xiàn)30多個(gè)DSPP突變

4、位點(diǎn),但不同國家或種族,不同家系其突變位點(diǎn)均不相同,也有報(bào)道某些家系未發(fā)現(xiàn)DSPP突變位點(diǎn)。為明確我國西部地區(qū)發(fā)現(xiàn)的2例DGI-II和1例DD-I家系的致病突變位點(diǎn),我們對三個(gè)家系進(jìn)行了臨床及相關(guān)基礎(chǔ)研究,為進(jìn)一步明確臨床診斷和闡明基因突變與DGI-II和DD-I型發(fā)病的相關(guān)性提供分子學(xué)診斷。
　　第一部分實(shí)驗(yàn):遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異常的臨床及家系研究
　　臨床上收集兩例遺傳性乳光牙患者和1例I型牙本質(zhì)發(fā)育不良患者。通過詢問病史

5、,口腔檢查,全身檢查,家系調(diào)查獲得初步的臨床資料。根據(jù)獲得的資料進(jìn)一步進(jìn)行X線片和實(shí)驗(yàn)室檢查。X線片主要包括全口曲面斷層片、頭顱側(cè)位片、胸片及脊柱線片檢查;實(shí)驗(yàn)室檢查主要包括血常規(guī)等。結(jié)果:病例1患者上下頜前牙呈半透明琥珀色改變,可看到部分牙體組織缺損,前牙反合,面中1/3塌陷,有家族史;X線片檢查發(fā)現(xiàn)部分牙齒髓腔閉鎖,牙根短小。病例2患者乳牙列牙齒磨耗較重,牙冠短小,牙齒呈黃褐色,個(gè)別乳前牙滯留,有家族史;X線片檢查發(fā)現(xiàn)全口牙齒髓腔閉

6、鎖,牙根短小。病例3:患者面部兩頰潮紅,全口牙齒顏色及形態(tài)無明顯異常,有家族史;X線片檢查示:非齲壞牙齒根尖周出現(xiàn)不明原因投射陰影。結(jié)論:前兩例病例具有DGI-II典型臨床表現(xiàn),X線片表現(xiàn)及家系圖譜分析符合常染色體顯性遺傳疾病,臨床診斷為遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全I(xiàn)I型。且病例1患者前牙反合,故其臨床診斷為DGI-II型伴隨安氏III類錯(cuò)合畸形。病例3根據(jù)病史,臨床表現(xiàn)及X線片檢查及家系圖譜分析也符合常染色體顯性遺傳疾病,臨床診斷為牙本質(zhì)發(fā)育

7、不良I型。本部分實(shí)驗(yàn)對三例患者進(jìn)行了初步的臨床診斷,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)打下臨床基礎(chǔ)。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異常的相關(guān)基礎(chǔ)研究
　　實(shí)驗(yàn)一,遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異?；颊逥SPP基因突變檢測
　　提取患者及其父母的外周靜脈血各3ml,抽取基因組DNA。參照文獻(xiàn)及Genebank數(shù)據(jù)庫設(shè)計(jì)DSPP基因引物,采用PCR方法擴(kuò)增DSPP外顯子,純化PCR產(chǎn)物,DNA測序,結(jié)合DSPPgDNA進(jìn)行序列分析。結(jié)果:通過基因測序分析檢

8、測,證實(shí)病例1存在12個(gè)堿基缺失的移碼突變,發(fā)現(xiàn)3個(gè)家系存在4個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single-nucleotidepolymorphismsSNP)。結(jié)論:病例1DSPP基因發(fā)現(xiàn)堿基缺失的移碼突變,進(jìn)一步證實(shí)了其為DGI-II型的臨床診斷,為進(jìn)一步研究DGI-II型與DSPP基因的相關(guān)性打下理論基礎(chǔ)。病例2DSPP基因未發(fā)現(xiàn)異常,考慮可能與其他遺傳因素有關(guān),還需進(jìn)一步對DSPP基因分析研究。病例3未發(fā)現(xiàn)臨床表征和DSPP基因突變有關(guān),考

9、慮可能與其它位于此區(qū)域內(nèi)的候選基因有關(guān),如DMP1等。
　　實(shí)驗(yàn)二,遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育異?；颊哐辣举|(zhì)超微結(jié)構(gòu)研究
　　收集病例2患者滯留乳前牙和同年齡,同性別患者的同名滯留乳前牙各兩顆并分成兩組。一組利用砂輪切片將牙齒縱破,打磨拋光,清洗,酸蝕,干燥后表面噴金,掃描電子顯微鏡進(jìn)行牙本質(zhì)表面觀察。另一組使用硬組織切片機(jī)將牙齒切割,打磨,沖洗,脫水,固定,封片后,顯微鏡下進(jìn)行牙本質(zhì)磨片觀察。結(jié)果:正常牙齒牙本質(zhì)小管排列整齊,形態(tài)規(guī)