一個遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良Ⅰ型家系的致病基因研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2 0 1 2 級碩士學位論文一個遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良I 型家系的致病基因研究R e s e a r c h o nt h e d i s e a s e —c a u s i n gg e n e i nah e r e d i t a r yd e n t i n d y s p l a s i at y 7 p eIf a m i l y課題來源：國家自然科學基金( 編號：3 1 3 7 1 2 7 9 )廣東省自然科

2、學基金( 編號：$ 2 0 1 2 0 1 0 0 0 9 5 5 1 )學位申請人 陽奇導 師 姓 名 徐湘民教授專 業(yè) 名 稱 遺傳學培 養(yǎng) 類 型 學術型培 養(yǎng) 層 次 碩士研究生所 在 學 院 基礎醫(yī)學院答辯委員會主席 張學教授答辯委員會委員 曾令文研究員王 瑩教授趙存友教授韋相才教授2 0 1 5 年4 月1 6 日 廣州摘要方面，斑馬魚中調(diào)控牙齒發(fā)育的基因大部分在人類中都有相應的同源基因，如B M P s 、F G F 、A

3、 l k 8 、P i 覷2 a 、D l x 、P a x 9 等多個基因。另，能譜分析、掃描電鏡比較成年斑馬魚牙齒與人類1 6 周齡胎兒牙胚的礦化程度和C a 、P 比例，發(fā)現(xiàn)兩者相似度極高。在組織和超微結構上，斑馬魚的牙齒也和人類牙齒相似性很高。因此，選擇斑馬魚作為牙齒發(fā)育研究的模式生物。目前對于D D ．I 型的相關致病基因的研究仍然是個迷，為解決這一難題，本課題組對一個河南鄭州的中國人家系進行了相關基礎研究。利用連鎖分析、全基

4、因組測序和s a n g e r 測序等方法證實V P S 4 B 基因突變導致D D ．I 型疾病，為D D ．I型疾病診斷提供分子學依據(jù)。通過對V P S 4 B 基因的分析，闡述了V P S 4 B 基因突變的致病機理。在細胞水平，利用V P S 4 B 過表達與s i ．R A N 敲降實驗對牙齒發(fā)育相關經(jīng)典通路- W N T 5 A 經(jīng)典通路中的相關基因的調(diào)控作用進行分析，為以后闡明牙齒發(fā)育機理提供重要的信息。利用斑馬魚這一模

5、式生物，以斑馬魚的牙齒發(fā)育系統(tǒng)作為模型，采用“敲低表達“ 和“過量表達”的方法結合“r e s c u e ”實驗，初步研究了v p s 4 b 基因在斑馬魚牙齒發(fā)育過程中的功能作用。材料與方法：1 ．對一個中國河南鄭州的中國人D D ．I 家系采用連鎖分析，全基因組外顯子測序、s a n g e r 測序以及限制性內(nèi)切酶酶切驗證等技術方法，確定致病基因與突變位點。家系樣本D N A 采用酚／氯仿方法提取，R N A 使用T R I Z

6、 O L 與試劑盒提取( R N e a s y M i n iK i t ．Q i a g e n ) ，然后用去g D N A 逆轉錄試劑盒轉錄為c D N A 。2 ．使用高分辨率熔煉曲線( H i g h R e s o l u t i o nM e l t i n g ，H R M ) 技術篩查當?shù)厝巳? 0 0 份隨機樣本，確定V P S 4 B 基因I V S 7 + 4 6 C > G 的突變頻率。3 ． V P