三個(gè)常染色體顯性遺傳性耳聾家系和一個(gè)聽神經(jīng)病家系致病基因的鑒定研究.pdf

1、耳聾是臨床上最常見的遺傳性疾病之一。引起耳聾的常見病因中,環(huán)境因素約占20-40％,遺傳因素約占60-80%。絕大多數(shù)的遺傳性耳聾為單基因缺陷致病。
　　本研究應(yīng)用全外顯子組測序技術(shù)對三個(gè)常染色體顯性遺傳性耳聾家系進(jìn)行致聾基因的鑒定,運(yùn)用經(jīng)典的候選基因測序技術(shù)對一個(gè)聽神經(jīng)病家系的致病基因進(jìn)行鑒定。發(fā)現(xiàn)了1個(gè)潛在的耳聾新基因WYF1,DFNA5的1個(gè)新致病性突變p.E375X,和OTOF基因的2個(gè)新致病性突變p.L517P和p.I1

2、967del。同時(shí),對檢測到的新致聾基因WYF1應(yīng)用斑馬魚模型進(jìn)行了初步的致病機(jī)制研究。現(xiàn)將本研究概述如下:
　　第一部分三個(gè)常染色體顯性遺傳性耳聾家系的臨床特征及致病基因鑒定研究
　　FJ-C199家系為五代67人的耳聾大家系,患病成員癥狀以進(jìn)行性加重的耳聾、耳鳴為主,部分成員伴有先天性斜視或眼震。多數(shù)患者于9-15歲出現(xiàn)聽力下降,最遲發(fā)病年齡為50歲左右,符合常染色體顯性遺傳性耳聾的特征。該家系的耳聾與眼震表型分別由不同

3、致病基因?qū)е禄蛴赏恢虏』蛞鹕袩o定論。
　　應(yīng)用全外顯子組測序技術(shù)進(jìn)行致病基因篩查,檢測到 WYF1基因的p.D326AfsX42移碼突變與耳聾表型共分離。WYF1為轉(zhuǎn)錄因子,在鼠、斑馬魚和雞胚的耳泡和眼泡中均有表達(dá)。9例攜帶WYF1基因突變的患者均有言語障礙,并伴有耳畸形和或聽力損失,部分患者眼發(fā)育異常。
　　GD-H238家系共5代,聽力下降者19人。聽力學(xué)表現(xiàn)為雙側(cè)對稱的進(jìn)行性加重的高頻感音神經(jīng)性耳聾。該家系內(nèi)2個(gè)

4、不同分支聽力下降時(shí)間分別為10-30歲和60歲(分別稱為A組和B組)。A組符合常染色體顯性遺傳感音神經(jīng)性耳聾特點(diǎn), B組符合顯性遺傳老年性聾特點(diǎn)。
　　應(yīng)用全外顯子組測序技術(shù)對GD-H238家系A(chǔ)組成員進(jìn)行致病基因篩查,已知耳聾基因DFNA5第8外顯子的p.E375X無義突變與該家系耳聾表型共分離,提示該突變?yōu)镚D-H238家系A(chǔ)組患病成員的致病性突變。目前發(fā)現(xiàn)的DFNA5基因的4個(gè)致病性突變均位于第7內(nèi)含子。本課題組檢測到的第8

5、外顯子無義突變p.E375X,是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)發(fā)生于外顯子的致病性突變,這將對DFNA5致病機(jī)制的探討和理解產(chǎn)生重要意義。
　　HB-Z177家系是一個(gè)共五代的常染色體顯性遺傳非綜合征型感音神經(jīng)性耳聾家系,患病成員合計(jì)10人,現(xiàn)存7人,發(fā)病年齡10-30歲。應(yīng)用全外顯子組測序?qū)ο茸C者基因組DNA進(jìn)行測序,對發(fā)現(xiàn)的3個(gè)已知耳聾基因突變位點(diǎn)及4個(gè)可疑變異位點(diǎn)進(jìn)行篩查,未發(fā)現(xiàn)陽性位點(diǎn),提示其致聾基因可能為新的致聾基因。擬增加1-2個(gè)樣

6、品行全外顯子組測序,以快速鑒定出該家系的致聾基因。
　　第二部分常染色體顯性遺傳性耳聾新基因WYF1初步功能研究
　　WYF1為轉(zhuǎn)錄因子,在鼠、斑馬魚和雞胚的耳泡和神經(jīng)視網(wǎng)膜中均有表達(dá)。以斑馬魚作為研究模型,注射嗎啉代反義寡核苷酸多聚物后,嗎啉代突變體出現(xiàn)耳石融合、眼睛變小的現(xiàn)象,提示降低 WYF1蛋白的表達(dá)水平后,內(nèi)耳發(fā)育將出現(xiàn)異常,提示W(wǎng)YF1基因在內(nèi)耳和眼發(fā)育過程中起著重要作用。
　　第三部分常染色體隱性遺傳聽神