一常染色體隱性非綜合征耳聾家系的候選基因分析.pdf

1、遺傳性耳聾發(fā)病率高，病因復(fù)雜，根據(jù)伴隨疾病的有無(wú)可以分為綜合征耳聾和非綜合征耳聾兩大類(lèi)。綜合征耳聾是指患者除耳聾外還伴有其他臨床表現(xiàn)，非綜合征耳聾是指患者以耳聾為唯一的臨床癥狀。非綜合征耳聾具有高度的遺傳異質(zhì)性，其遺傳方式有常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳、X連鎖遺傳和線粒體遺傳，不同遺傳方式又涉及多個(gè)基因位點(diǎn)。其中常染色體隱性遺傳方式在語(yǔ)前聾中所占的比例最大，成為遺傳性耳聾的研究熱點(diǎn)。 分離非綜合征耳聾致病基因是了解其發(fā)生機(jī)制

2、和制定有效預(yù)防措施的關(guān)鍵。目前已定位的非綜合征耳聾基因有130個(gè)，分離的基因有43個(gè)，其中分離的常染色體隱性非綜合征耳聾基因有22個(gè)。 本研究所在山東省遺傳病調(diào)查中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)常染色體隱性非綜合征耳聾近親結(jié)婚家系。2003年程琳等采用純合子定位方法，對(duì)常染色體進(jìn)行了基因組掃查，將該家系致病基因定位于D17S1850和D17S1818之間的5.07cM區(qū)域，UCSC物理圖距為5.5Mb。 該區(qū)域有候選基因100多個(gè)，為分離該

3、家系致病基因，本研究采用定位候選克隆的策略，根據(jù)致病基因候選區(qū)域內(nèi)的已知基因功能，從中選擇了三個(gè)候選基因進(jìn)行突變分析。 MYOHDl基因?qū)儆诩∏虻鞍准易?，研究表明該家族成員在遺傳性耳聾發(fā)生中起重要作用，在已經(jīng)克隆的22個(gè)常染色體隱性非綜合征耳聾基因中，有4個(gè)肌球蛋白基因。因此，MYOHD1成為本文分析家系的最佳候選基因。 LASP1基因在人類(lèi)組織廣泛表達(dá)，編碼的蛋白具有LIM基序和SH3結(jié)構(gòu)域，在運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞骨架的組織以及細(xì)胞遷移

4、過(guò)程中發(fā)揮作用。 TAF15基因，TBP(TATA box binding protein)關(guān)聯(lián)因子15，廣泛存在于胎兒和成人的各種組織。TAF15與TATA盒結(jié)合蛋白和其他TATA盒結(jié)合蛋白結(jié)合因子一起屬于RNA多聚酶II工轉(zhuǎn)錄多蛋白復(fù)合體。 LASP1和TAF15兩個(gè)基因在耳蝸表達(dá)，它們可能在聽(tīng)覺(jué)過(guò)程中具有重要生理作用，可以作為遺傳性耳聾的候選基因。 確定候選基因后，首先設(shè)計(jì)用以擴(kuò)增編碼序列和外顯子內(nèi)含

5、子接頭序列的引物，在對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行長(zhǎng)度分析后，利用上、下游引物對(duì)純化的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)中的序列通過(guò)BLAST進(jìn)行比對(duì)。 本研究在MYOHD1基因的第四外顯子檢測(cè)到一個(gè)錯(cuò)義突變，即第17位堿基T被C所替代(T17C)，該突變導(dǎo)致MYOHD1基因所編碼的蛋白第6位的天冬酰胺被絲氨酸取代(D6S)。查詢NCBI SNP數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)該突變不是已知SNP。在LASP1第5外顯子檢測(cè)到一堿基改變，即A438G，這個(gè)

6、堿基是構(gòu)成第146個(gè)密碼子的第三個(gè)堿基，該突變?yōu)橥x突變，即Ser146Ser。 為確定MYOHD1基因T17C突變?cè)谥袊?guó)山東常染色體隱性非綜合征耳聾家系發(fā)生中的作用，本研究進(jìn)行了三方面的分析：第一，對(duì)家系其他成員進(jìn)行突變檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該突變?cè)诩蚁抵信c疾病共分離；第二，對(duì)100名無(wú)血緣關(guān)系的正常個(gè)體進(jìn)行PCR-RFLP突變分析，檢測(cè)到33個(gè)正常個(gè)體攜帶T17C變異；第三，對(duì)位點(diǎn)在進(jìn)化中的保守性進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)不是保守位點(diǎn)。以