遺傳性易栓癥的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、背景：近年來(lái)，血栓性疾病如缺血性心腦血管病、靜脈血栓栓塞癥(Venousthromboembolism，VTE)等在年輕患者中的發(fā)病率逐年升高。研究表明，血栓的發(fā)生除了與獲得性危險(xiǎn)因素如手術(shù)、骨折、腫瘤等有關(guān)外，遺傳性抗凝蛋白缺陷如蛋白C(PC)、蛋白S(PS)或抗凝血酶(AT)缺陷等與血栓形成具有密切的關(guān)系。FV Leiden導(dǎo)致的血漿活化蛋白C抵抗(APCR)和凝血酶原G20210A突變已被證實(shí)是西方人群血栓性疾病最為相關(guān)的危險(xiǎn)因素

2、。然而，我國(guó)APCR的發(fā)病率并不像國(guó)外那樣高，且FV Leiden和凝血酶原G20210A突變罕見(jiàn)。為了進(jìn)一步研究國(guó)內(nèi)血栓性疾病發(fā)生的病因及高危因素，探討抗凝蛋白缺陷在其發(fā)生中的作用，我們對(duì)85例“原因不明”(即排除可能存在的獲得性因素)的血栓性疾病患者和50例健康對(duì)照者的蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、抗凝血酶(AT)活性水平進(jìn)行了檢測(cè)和分析。 遺傳性蛋白C(protein C，PC)缺陷癥是VTE的主要遺傳性危險(xiǎn)因素之一，特

3、點(diǎn)主要表現(xiàn)為自幼反復(fù)發(fā)生動(dòng)靜脈血栓，屬常染色體顯性遺傳病，多數(shù)伴有血栓家族史。迄今我國(guó)尚缺乏PC缺陷癥的大規(guī)模人群調(diào)查研究，僅有個(gè)案報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)遺傳性PC缺陷癥家系，通過(guò)分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)了新的PC基因雜合錯(cuò)義突變和雜合缺失突變。 目的：1.探討蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、和抗凝血酶(AT)活性水平在中國(guó)人“原因不明”血栓性疾病患者中的發(fā)生情況并評(píng)價(jià)其引起血栓的危險(xiǎn)性。2.對(duì)一例靜脈血栓患者進(jìn)行臨床診斷、家系調(diào)查及表

4、型研究，并對(duì)該遺傳性PC缺陷癥患者及家系成員的PC基因進(jìn)行測(cè)序分析，分析遺傳規(guī)律，對(duì)其分子發(fā)病機(jī)制進(jìn)行初步研究。 方法：PC活性(PC：A)、蛋白S活性(PS：A)和抗凝血酶活性(AT：A)采用發(fā)色底物法測(cè)定；PC抗原(PC：Ag)采用ELISA法檢測(cè)。檢測(cè)85例血栓性疾病患者與50例正常健康對(duì)照者血漿PC、PS、AT活性水平并作比較分析。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(－x±s)表示，組間樣本資料采用t檢驗(yàn)；危險(xiǎn)度采用多變量log

5、istic回歸分析；P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)一例先證者及家系成員PC基因的9個(gè)外顯子序列PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物回收、純化后進(jìn)行測(cè)序，用Chromas軟件將測(cè)序結(jié)果與美國(guó)NCBI基因庫(kù)所公布的序列進(jìn)行比較(Blaster)，尋找基因突變。 結(jié)果：1)85例血栓性疾病患者中位年齡43歲(17～69歲)，其中≤45歲60例(70.6％)，>45～50歲20例(23.5％)，50歲以上5例(5.9％)；男性50例，女性35例，男女

6、比例為1.4:1。動(dòng)脈血栓組18例(男性10例，女性8例)，中位年齡40歲；靜脈血栓組67例(男性40例，女性27例)，中位年齡45歲?？鼓鞍谆钚运奖容^發(fā)現(xiàn)：動(dòng)脈血栓組和靜脈血栓組PC、PS、AT活性均明顯低于正常對(duì)照組(P<0.001)；再發(fā)組PC、PS、AT平均活性低于初發(fā)組(P<0.01)；年齡<45歲組患者PC、PS、AT平均活性低于45歲以上組(P<0.01)。動(dòng)脈血栓組PC、PS、AT平均活性稍高于靜脈血栓組，血栓復(fù)發(fā)組

7、抗凝蛋白平均活性稍高于多發(fā)組，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，P>0.05)。共有26例患者存在抗凝蛋白缺陷(占30.6％)：PC缺陷7例(8.2％)，PS缺陷9例(10.6％)，AT缺陷5例(5.9％)，復(fù)合缺陷5例(PS合并AT缺乏4例，PC合并AT缺乏1例)(5.9％)?？鼓鞍兹毕萁M血栓發(fā)生的相對(duì)危險(xiǎn)性明顯增加(OR=10.67，95％CI為4.23～27.56)。其中PS缺陷發(fā)生血栓的危險(xiǎn)度最高。2)先證者PC：Ag和PC：

8、A分別為1.4和34％，表現(xiàn)為Ⅰ型PC缺陷癥；其姐姐及其兒子PC：A分別為52％和53％，其女兒PC：A為84％(正常范圍70～130％)?；蚍治霭l(fā)現(xiàn)PC基因第9外顯示子區(qū)G12622T雜合錯(cuò)義突變，導(dǎo)致Val(GTG)274 Leu(TTG)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)第9外顯子區(qū)存在13010～13012或13013～13015位TCC(L404)雜合缺失。先證者兒子也存在上述2種突變。家系成員(Ⅰ 2、Ⅱ 1、Ⅱ 2)在第1外顯子及側(cè)翼區(qū)第240

9、5位、2583位分別存在G/C、A/T多態(tài)性。 結(jié)論：1)抗凝蛋白缺陷是中國(guó)血栓患者最常見(jiàn)的遺傳性易患因素。中國(guó)人“原因不明”的血栓性疾病患者普遍存在抗凝蛋白水平低下，抗凝蛋白缺陷不僅與血栓性疾病的發(fā)生有關(guān)，而且與血栓復(fù)發(fā)密切相關(guān)。2)該家系為I型遺傳性PC缺陷癥。PC基因第9外顯子G12622T雜合錯(cuò)義突變，及13010～13012或13013～13015位TCC雜合缺失，導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成過(guò)程中第274位Val被Leu替代，以及