結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性及常染色體顯性遺傳性視神經(jīng)萎縮的臨床與基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的臨床表型分析，基因篩查及血漿脂質(zhì)組學(xué)分析
　　目的:對結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性（Bietti crystalline dystrophy，BCD）的臨床表現(xiàn)進行總結(jié)分析，通過分子遺傳學(xué)研究確定致病突變，并探討表型與基因型的聯(lián)系。對部分患者進行血漿脂代謝組分析，試圖探索BCD患者特異的脂代謝異常。
　　方法:納入1998年-2017年3月在北京協(xié)和醫(yī)院眼科遺傳門診就

2、診的BCD患者及家系。1.臨床研究:詳細詢問患者病史，家族史并繪制家系圖。行一般眼科檢查（視力，屈光度，眼前節(jié)及眼底等），共聚焦顯微鏡檢查角膜緣，眼底彩色照相，光學(xué)相干斷層掃描(optical coherence tomography，OCT)，眼底自發(fā)熒光成像，視野(visual field，VF)以及視網(wǎng)膜電流圖（electroretinogram，ERG）檢查。2.分子遺傳學(xué)研究:采集患者及家族成員靜脈血，提取基因組DNA。對先證

3、者CYP4V2基因的11個外顯子及外顯子-內(nèi)含子交界處進行聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)擴增及直接測序。直接測序未發(fā)現(xiàn)突變者將行多重連接依賴探針擴增（multiplex bgation-dependent probe amplication，MLPA）檢測。表現(xiàn)不典型的BCD患者將進行二代測序。3.脂質(zhì)組學(xué)分析:采集不同年齡組的BCD患者及無親緣關(guān)系正常對照的血漿，采用超高效液相色譜-質(zhì)譜法

4、進行非靶向脂代謝組分析。
　　結(jié)果:共納入來自139個家系共168名BCD患者。139名患者（先證者）中，男性65例，女性74名，年齡17～75歲。發(fā)現(xiàn)有近親結(jié)婚史的家系11個(8.3％)，假顯性遺傳14個(10.6％)及假X連鎖遺傳家系2個(1.5％)。
　　1.臨床表現(xiàn):BCD患者中位發(fā)病年齡27歲。62.1％以夜盲為首發(fā)癥狀，19％以視力下降為首發(fā)癥狀，16.0％主訴視力下降伴夜盲為首發(fā)癥狀，3例患者無自覺癥狀(2％)

5、，1例患者主訴眼前黑影飄動。BCD患者最佳矯正視力介于LP～1.5。40.4％合并輕度近視，35.1％合并中度近視，15.8％合并高度近視，約一半的患者合并散光。17.8％的患者在裂隙燈下觀察到角膜緣結(jié)晶顆粒。配合了角膜緣共聚焦顯微鏡檢查的16例BCD患者（其中包括10例在裂隙燈下未觀察到結(jié)晶的患者，及6例眼底偶見或未見結(jié)晶顆粒的患者）均觀察到結(jié)晶顆粒。結(jié)晶顆粒位于角膜上皮層及淺基質(zhì)層，結(jié)晶形態(tài)有針尖樣，桿狀或點狀。BCD患者的眼底表現(xiàn)

6、為數(shù)量不等的結(jié)晶顆粒沉積于視網(wǎng)膜，位置可以集中于后極部或散在分布，視網(wǎng)膜色素上皮層(retinalpigment epithelium，RPE)層及脈絡(luò)膜毛細血管層不同程度萎縮，伴不規(guī)則色素團塊沉積。共14例患者合并眼底并發(fā)癥(9.5％)，其中8例為黃斑區(qū)脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)(57.1％)，4例為黃斑裂孔(macular hole,MH)網(wǎng)脫(28.6％)。OCT表現(xiàn)為橢圓體

7、帶不連續(xù)或消失，RPE萎縮，透見脈絡(luò)膜大血管及鞏膜信號，平均黃斑中心凹厚度116.6μm。依據(jù)疾病進展模式將132例BCD患者（先證者）分為中央型（24例，占18.2％），周圍型（87例，占66.9％）2個類型。21例患者因處于疾病晚期而無法分型（占15.9％）。中央型BCD以后極部視網(wǎng)膜受累為主，逐漸累及周邊部視網(wǎng)膜。周圍型BCD周邊視網(wǎng)膜首先受累，逐漸發(fā)展累及后極部視網(wǎng)膜，進展過程類似于視網(wǎng)膜色素變性。兩者在首發(fā)癥狀，平均視力，合并

8、眼底并發(fā)癥的風(fēng)險，VF缺損類型及視網(wǎng)膜總體功能方面存在顯著差異(P＜0.001)。
　　2.分子遺傳學(xué)研究:一代測序聯(lián)合MLPA共確定了96.4％患者的CYP4V2致病突變，IVS6-8de117bp/insGC是最常見的突變等位基因(61.7％)。確定CYP4V2致病突變共33個，其中51.5％為新發(fā)突變。尚未發(fā)現(xiàn)不同突變與表型的相關(guān)性。二代測序發(fā)現(xiàn)2例多基因共同作用的CYP4V2相關(guān)性視網(wǎng)膜變性。此外，還報道了1例合并手指異常

9、的BCD患者，為IVS6-8del17bp/insGC和c.A761G復(fù)合雜合突變。
　　3.血漿脂質(zhì)組學(xué)分析:初步分析發(fā)現(xiàn)有10余種脂類化合物在BCD患者血漿中較正常對照明顯升高，這些脂類化合物主要屬于?；视秃陀坞x脂肪酸。結(jié)論:BCD患者具有較特異的眼部表現(xiàn)，但輕重、形態(tài)各有差異。眼底并發(fā)癥在BCD患者中并不少見。新的分型方法可以較好地解釋臨床表型及判斷預(yù)后。共聚焦顯微鏡有助于BCD的診斷。一代測序可以確定絕大多數(shù)BCD患者的

10、致病突變。中國BCD患者中也存在CYP4V2基因大片段改變的現(xiàn)象。對于表型不典型的BCD患者，采用二代測序的方法有助于發(fā)現(xiàn)潛在的多基因缺陷。CYP4V2等位基因突變頻率在中國人群中較高，應(yīng)建議BCD患者的配偶進行CYP4V2基因篩查。BCD患者血漿脂代謝組研究為進一步探究BCD發(fā)病機制，診斷與治療提供了新的線索。
　　第二部分 常染色體顯性視神經(jīng)萎縮的臨床及基因研究
　　目的:常染色體顯性遺傳性視神經(jīng)萎縮(ADOA)是遺傳性

11、視神經(jīng)萎縮最常見的類型之一。大部分ADOA是由OPA1基因突變導(dǎo)致的。本研究的目的在于分析一組中國ADOA家系的臨床特征及基因突變情況。
　　方法:對來自8個ADOA家系共17名患者進行了詳細的臨床評估。從患者外周血中提取基因組DNA。對7個典型ADOA家系進行OPA1基因全部外顯子及外顯子/內(nèi)含子交界處進行Sanger測序。對1個表型不典型的ADOA家系進行外顯子捕獲聯(lián)合二代測序。RT-PCR用于檢測剪切突變mRNA的改變。

12、r>　　結(jié)果:所有17名患者均表現(xiàn)為視力低下及視盤蒼白，然而他們臨床表型的輕重程度卻各有差異。其中2名患者合并聽力下降。本研究共確定6個OPA1新發(fā)突變及2個已知突變，包括4個錯義突變(c.T2235G，c.T2340G，c.T1468C and c.A1567G)，2個剪切突變(c.2984-1_2986del and c.2983+5G＞A)，1個小片段缺失(c.2960_2968delGCGTTCAAC)以及1個小片段插入突變(c