男性生殖道細(xì)菌群落組成與生殖健康的關(guān)系.pdf

1、由于檢測(cè)方法的局限,對(duì)于定植于男性生殖道中的細(xì)菌群落組成情況及其與生殖健康之間的關(guān)系一直存在爭(zhēng)論。在本研究中,我們利用分子微生態(tài)學(xué)檢測(cè)技術(shù),分別對(duì)于正常和患病男性精液以及前列腺液中的細(xì)菌群落組成進(jìn)行研究,并通過(guò)比較不同健康狀態(tài)下男性生殖道中的細(xì)菌群落組成差異,揭示男性生殖道細(xì)菌群落組成與男性生殖健康之間的關(guān)系。
　　在研究的第一部分,我們將19例正常男性和58例不育癥患者作為研究對(duì)象,以揭示正常和不育男性生殖道中細(xì)菌群落組成情況,

2、并進(jìn)一步研究精液中細(xì)菌群落組成與男性不育之間的關(guān)系。
　　首先,對(duì)一部分隨機(jī)選取的精液樣本進(jìn)行革蘭染色,結(jié)果顯示男性精液中普遍存在細(xì)菌,且細(xì)菌的類(lèi)型較多,細(xì)菌的數(shù)量也多于精子的數(shù)量。然后,對(duì)于每個(gè)樣本進(jìn)行基因組DNA抽提,利用針對(duì)原核細(xì)胞16S rRNA基因V1、V2片段的通用引物對(duì)每個(gè)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行焦磷酸測(cè)序,通過(guò)序列比對(duì)來(lái)研究樣本中細(xì)菌群落組成結(jié)構(gòu)。通過(guò)對(duì)每個(gè)樣本中細(xì)菌群落組成進(jìn)行基于假F的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,發(fā)

3、現(xiàn)精液中細(xì)菌群落組成可以歸為六種類(lèi)型。利用卡方檢驗(yàn)和Fisher氏精確性檢測(cè),發(fā)現(xiàn)六種細(xì)菌群落組成類(lèi)型與精液參數(shù)之間沒(méi)有相關(guān)性(p＞0.15)。利用比例優(yōu)勢(shì)模型對(duì)于數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)在所有檢測(cè)到的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌中,普氏厭氧球菌與精子質(zhì)量存在負(fù)相關(guān)(p=0.0012)。通過(guò)本研究,我們發(fā)現(xiàn)存在于精液中的細(xì)菌類(lèi)型與其他作者報(bào)道的存在于女性細(xì)菌性陰道病患者的生殖道中的類(lèi)型相似,提示男女性生殖道可能具有一些共有的細(xì)菌類(lèi)型,在某些條件下這些細(xì)菌可能會(huì)導(dǎo)

4、致不育或生殖道疾病。
　　在研究的第二部分,為了探討慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛綜合征(CP/CPPS)和不育癥患者前列腺液細(xì)菌群落組成情況,我們將11例不育男性患者和51例CP/CPPS患者的前列腺液作為研究對(duì)象,CP/CPPS患者分為炎癥性CP/CPPS和非炎癥性CP/CPPS兩組類(lèi)型,26例正常男性的前列腺液作為對(duì)照組。
　　首先,對(duì)樣本進(jìn)行全基因組DNA抽提,并利用通用引物以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到16S

5、 rRNA的V3區(qū)基因片段。結(jié)果顯示,患者組前列腺液16S rRNA基因的陽(yáng)性率高于正常男性(p＜0.01),不同患者組之間前列腺液16S rRNA基因陽(yáng)性率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。對(duì)于三種不同類(lèi)型患者前列腺液中的16S rRNA基因進(jìn)行變性梯度凝膠電泳,并對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS-DA),發(fā)現(xiàn)不同患者組中的細(xì)菌群落組成各不相同。有三個(gè)條帶在區(qū)分不同疾病組細(xì)菌群落組成中起到了重要的作用(p＜