外源性脂肪源干細(xì)胞移植改善D-半乳糖致衰老大鼠性能力的研究.pdf

1、背景：衰老(senescence)又稱老化，是整個(gè)機(jī)體形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理機(jī)能的全面衰退，是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、復(fù)雜的過(guò)程。當(dāng)前預(yù)防和延緩衰老已成為生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)。有關(guān)衰老機(jī)制的研究一直是生物學(xué)、老年醫(yī)學(xué)研究的前沿課題。對(duì)其機(jī)制的研究中有自由基學(xué)說(shuō)、代謝學(xué)說(shuō)、免疫系統(tǒng)退化學(xué)說(shuō)、端粒酶變化等多種學(xué)說(shuō)，但沒(méi)有一種學(xué)說(shuō)能完整解釋衰老的機(jī)制。原林教授提出的“筋膜學(xué)說(shuō)”認(rèn)為:人體由兩部分組成，一個(gè)是由尚未分化的非特異性結(jié)締組織（筋膜）支架所構(gòu)成的支持與儲(chǔ)備

2、系統(tǒng)，一個(gè)是以已分化的功能細(xì)胞為基礎(chǔ)的功能系統(tǒng)。功能系統(tǒng)在支持與儲(chǔ)備系統(tǒng)支持下維持結(jié)構(gòu)與功能的穩(wěn)定，而支持與儲(chǔ)備系統(tǒng)源源不斷的為功能系統(tǒng)的細(xì)胞更新和功能活動(dòng)提供細(xì)胞供應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。功能系統(tǒng)是以功能細(xì)胞的專能特化為基礎(chǔ)的，而支持與儲(chǔ)備系統(tǒng)的筋膜支架以干細(xì)胞為核心，通過(guò)分化出各種定向干細(xì)胞，為功能系統(tǒng)的更新提供源源不斷的細(xì)胞補(bǔ)充，并為功能系統(tǒng)的各種細(xì)胞的更新、代謝提供一個(gè)穩(wěn)定的內(nèi)部環(huán)境。即衰老是筋膜中干細(xì)胞儲(chǔ)備逐漸耗竭的過(guò)程，而如何保持筋膜

3、的正常狀態(tài)，從而為功能系統(tǒng)提供穩(wěn)定的細(xì)胞來(lái)源并維持其向功能細(xì)胞的正常分化，是延長(zhǎng)生命周期的關(guān)鍵。如果衰老時(shí)減少的干細(xì)胞能得到及時(shí)的補(bǔ)充，為機(jī)體提供新的細(xì)胞儲(chǔ)備，可修復(fù)機(jī)體損傷，延緩衰老、延長(zhǎng)生命周期。不同于其他的衰老學(xué)說(shuō)，筋膜學(xué)說(shuō)從另一個(gè)不同的角度-發(fā)育生物學(xué)-對(duì)衰老提出了新的認(rèn)識(shí)，同時(shí)與從微觀角度提出的各種衰老學(xué)說(shuō)并無(wú)矛盾，認(rèn)為各種微觀角度的改變最終導(dǎo)致的結(jié)果都是筋膜組織——支持與儲(chǔ)備系統(tǒng)功能的減退。間充質(zhì)干細(xì)胞(menchymal

4、stem cells)具有自我更新、多向分化的能力。最初是由Friendenstein等發(fā)現(xiàn)，而且證明其在體外可以分化成為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞，而后其它的研究小組發(fā)現(xiàn)骨髓來(lái)源的MSCs不僅可以分化為中胚層來(lái)源的組織，而且可以分化為內(nèi)胚層和外胚層來(lái)源的組織。而且間充質(zhì)干細(xì)胞的多組織來(lái)源與筋膜結(jié)締組織支架的全身分布是一致的，其縱向、橫向分化的生物學(xué)特性與筋膜學(xué)提出的筋膜結(jié)締組織對(duì)機(jī)體的支持儲(chǔ)備作用也是一致的。脂肪源干細(xì)胞(ADSCs)是筋膜中

5、未分化干細(xì)胞的一種儲(chǔ)備形式。ADSCs具有多向分化潛能，能夠跨胚層分化。它可以分化成中胚層來(lái)源的脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞;外胚層來(lái)源的神經(jīng)細(xì)胞;也可以分化成內(nèi)胚層來(lái)源的內(nèi)皮細(xì)胞及肝細(xì)胞等。ADSCs具有低免疫原性，免疫調(diào)節(jié)功能和分泌細(xì)胞因子等能力，為異體移植提供了有利條件，使ADSCs成為生物治療的亮點(diǎn)之一;ADSCs分泌細(xì)胞因子抗老化的作用，已經(jīng)被臨床廣泛應(yīng)用。ADSCs不僅可以用來(lái)進(jìn)行各種退行性和衰竭疑難病的替代治療，

6、而且可用來(lái)進(jìn)行輔助的免疫治療。脂肪源干細(xì)胞可以調(diào)節(jié)受損組織局部微環(huán)境，可以分泌一系列細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子到周?chē)M織液中，調(diào)節(jié)組織微環(huán)境，形成有利于干細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境——“干細(xì)胞巢”——招募來(lái)自于受體的內(nèi)源性干細(xì)胞到達(dá)靶點(diǎn)，并使其向所需要的特定組織細(xì)胞定向分化。脂肪干細(xì)胞本身能夠耐受缺氧，同時(shí)在缺氧的環(huán)境中還能釋放抗氧化物質(zhì)、自由基清除劑、分子伴侶、熱休克蛋白等，清除受損局部的細(xì)胞毒性物質(zhì)，促進(jìn)尚存活的細(xì)胞復(fù)蘇，在脂肪移植后形成有利于組織細(xì)

7、胞存活和功能維持的微環(huán)境。ADSC還有可能通過(guò)旁分泌細(xì)胞因子促進(jìn)組織修復(fù)。經(jīng)靜脈注射的ADSC可自主聚集于病灶部位參與修復(fù)損傷。ADSC的這種“歸巢”作用，其具體機(jī)制不明。有報(bào)道稱通過(guò)增加膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1(membranetype1matrix metallop roteinase，MT1-MMP)表達(dá)和促進(jìn)MMP-2酶原的激活可增強(qiáng)ADSCs的遷移。近期研究發(fā)現(xiàn)，ADSC能釋放新的線粒體至損害的細(xì)胞，從而挽救有氧代謝的過(guò)程。這說(shuō)明

8、ADSC可通過(guò)多種機(jī)制參與組織的修復(fù)。簡(jiǎn)言之，ADSCs可能通過(guò)以下機(jī)制修復(fù)或者重建組織:首先，ADSCs被植入一個(gè)受損的或是壞死的組織，它們能以副分泌的方式分泌出細(xì)胞活素和生長(zhǎng)因子以刺激修復(fù)。ADSCs可以提供抗氧化劑、自由基清除劑、熱休克蛋白等給待修復(fù)組織，從而清除局部環(huán)境中所釋放的有毒物質(zhì)，促進(jìn)仍存活的細(xì)胞的修復(fù)。另外，ADSCs可以通過(guò)刺激內(nèi)生性干細(xì)胞補(bǔ)充到待修復(fù)的臟器或自身直接遷移補(bǔ)充到待修復(fù)區(qū)域，以調(diào)節(jié)干細(xì)胞的微環(huán)境，并且促

9、進(jìn)它們沿著需要的方式分化為功能細(xì)胞，從而更新機(jī)體衰老的功能細(xì)胞，維持機(jī)體平衡。D-gal所致亞急性衰老模型是國(guó)內(nèi)外比較公認(rèn)的衰老模型。在一定時(shí)間內(nèi)連續(xù)給動(dòng)物注射D-半乳糖使機(jī)體細(xì)胞糖代謝及脂代謝紊亂，體內(nèi)糖濃度增高后被醛糖還原酶催化還原成半乳糖醇，其不能被細(xì)胞進(jìn)一步代謝而堆積體內(nèi)、影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、功能障礙、代謝紊亂，不僅破壞并消耗機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)，使自由基積聚;同時(shí)在半乳糖還原成半乳糖醇的過(guò)程中又使細(xì)胞膜脂質(zhì)受損，過(guò)氧化

10、脂質(zhì)、脂褐素增高，出現(xiàn)衰老。糖代謝紊亂必然會(huì)引起心、肝、腎、腦等重要器官代謝異常，最后出現(xiàn)衰老。D-半乳糖模型因全面影響細(xì)胞的代謝功能和一些重要的酶的功能，所導(dǎo)致的老化較全面。其老化與機(jī)能減退的具體機(jī)制可能與代謝障礙、免疫損傷、自由基損傷及線粒體損傷等相關(guān)。目前，該模型已廣泛應(yīng)用于研究衰老機(jī)制以及延緩衰老藥物的篩選。D-gal致亞急性衰老模型可以模擬腦、肝臟、腎臟、皮膚、性腺軸、骨質(zhì)疏松、免疫系統(tǒng)等多臟器的損傷。文獻(xiàn)報(bào)道可應(yīng)用干細(xì)胞移植

11、治療，亦有文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)用中藥提取物、中藥湯方、激素及針灸等多種方法治療此模型造成的衰老。雄激素可提高性中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性，誘發(fā)性欲沖動(dòng)，從而維持正常的性機(jī)能。睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydig cells)是機(jī)體分泌睪酮的主要細(xì)胞，分泌量約占身體總睪酮的95％;國(guó)際上對(duì)男性生殖疾病治療的研究也多集中在Leydig細(xì)胞的培養(yǎng)和移植上。睪丸間質(zhì)細(xì)胞具有合成、分泌睪酮的特點(diǎn)。睪酮合成過(guò)程中，17β-HSD3、3β-HSD1催化脫氫異雄酮形成睪酮。而3

12、β-HSD是合成睪酮的關(guān)鍵酶，成年大鼠睪丸中只有間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)3β-HSD，所以目前對(duì)間質(zhì)細(xì)胞的鑒定一般都采用3β-HSD特異性染色方法。Percoll梯度濃度分離的Leydig細(xì)胞量大、純度較高、細(xì)胞活力良好，初步解決了組織工程技術(shù)構(gòu)建雄激素分泌組織的種子細(xì)胞來(lái)源的問(wèn)題。用該方法獲得的Leydig細(xì)胞所構(gòu)建的組織工程化雄激素分泌組織能在較長(zhǎng)時(shí)期維持睪酮分泌功能。為探討外源性脂肪源干細(xì)胞移植是否具有延緩衰老的作用及其作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)體內(nèi)觀

13、察移植外源性ADSCs對(duì)D-半乳糖(D-gal)衰老大鼠自由基及免疫等衰老指標(biāo)，以及對(duì)衰老大鼠性能力的改善等方面的影響;體外觀察脂肪源干細(xì)胞基質(zhì)與D-gal處理的睪丸間質(zhì)細(xì)胞(LCs)共培養(yǎng)，探討ADSCs對(duì)Leydig cell的保護(hù)性作用，探索一種新的抗衰老機(jī)理，為臨床延緩衰老的治療提供新的思路和方法。
　　 目的：研究移植脂肪源干細(xì)胞對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠相關(guān)衰老指標(biāo)以及交配能力的影響，探討臨床替代療法的治療機(jī)理，進(jìn)一步為

14、筋膜結(jié)締組織是干細(xì)胞的儲(chǔ)備源泉提供證據(jù)支持，為筋膜學(xué)提供理論支撐。①檢驗(yàn)非特異性筋膜結(jié)締組織中是否存在脂肪源干細(xì)胞。②觀察移植脂肪源干細(xì)胞能否對(duì)D-半乳糖衰老大鼠的血清、自由基及免疫功能產(chǎn)生影響，闡述移植脂肪源干細(xì)胞對(duì)抗D-半乳糖衰老的血清學(xué)意義。③通過(guò)觀察交配實(shí)驗(yàn)，研究移植筋膜結(jié)締組織中的脂肪源干細(xì)胞能否提高D-半乳糖致衰老大鼠的性能力;通過(guò)免疫組織化學(xué)染色，觀察移植標(biāo)記的脂肪源干細(xì)胞在睪丸組織中的定位和移位情況，及睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌3

15、β-HSD、17β-HSD的情況;通過(guò)免疫組織化學(xué)染色，觀察睪丸間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及其凋亡狀況;通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)，觀察睪酮分泌狀況。④體外分離培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞，觀察脂肪干細(xì)胞對(duì)D-gal處理的睪丸間質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)性作用，為“筋膜學(xué)”抗衰老相關(guān)理論提供進(jìn)一步佐證。
　　 方法：⑴取成年SD大鼠腹股溝脂肪墊，用酶消化法分離、培養(yǎng)筋膜結(jié)締組織的脂肪源干細(xì)胞。通過(guò)用形態(tài)學(xué)、功能學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)鑒定非特異性筋膜結(jié)締組織源細(xì)胞是否符合間充質(zhì)干

16、細(xì)胞的特性，進(jìn)而判斷非特異性筋膜結(jié)締組織中是否含有間充質(zhì)干細(xì)胞。⑵體外Percoll分離液梯度分離培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞，并通過(guò)形態(tài)學(xué)及3β-HSD特異性染色鑒定;以0、4、8、12、16g/L不同濃度的D-gal處理睪丸間質(zhì)細(xì)胞，每個(gè)濃度做三個(gè)復(fù)孔，每個(gè)孔重復(fù)三次。24h后，計(jì)算細(xì)胞存活率，篩選最適濃度模擬細(xì)胞衰老模型;另流式細(xì)胞儀檢測(cè)8g/L D-半乳糖處理Leydig cell在0、24、48、72h不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞周期變化。⑶體外分離

17、培養(yǎng)4代ADSCs，取上清制備脂肪干細(xì)胞基質(zhì)(ADSC-CM);8g/L D-半乳糖處理Leydig cell，同時(shí)與ADSC-CM共培養(yǎng)24h后，MTT檢測(cè)其細(xì)胞活性;流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞共培養(yǎng)24h的周期變化;共培養(yǎng)48h，SA-β-半乳糖酐酶染色，每組取4個(gè)視野，每個(gè)視野至少100個(gè)細(xì)胞。檢測(cè)細(xì)胞衰老情況;免疫組化觀察3β-HSD分泌情況。⑷30只SD大鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組（A組）、模型組（B組）和治療組（C組），每組10只。B

18、、C組頸背部皮下注射15％D-半乳糖1000mg/（kg·d），連續(xù)8周復(fù)制亞急性衰老模型，A組的大鼠每天給予生理鹽水1.6ml頸背部皮下注射。⑸模擬衰老模型成功后，治療組內(nèi)的大鼠進(jìn)行脂肪源干細(xì)胞靜脈移植:移植的第3代ADSCs在進(jìn)行傳代后，在培養(yǎng)基中摻入10μmol/L的Brdu，孵育3天后消化收集，無(wú)菌生理鹽水重懸，制成300萬(wàn)/ml;同樣每只大鼠經(jīng)尾靜脈注射ADSCs3×106個(gè)，模型組輸入生理鹽水1ml。⑹交配實(shí)驗(yàn)的雌鼠分別在實(shí)

19、驗(yàn)前48h和4h采用皮下注射苯甲酸雌二醇200μg/kg和黃體酮2mg/kg用來(lái)誘導(dǎo)雌鼠發(fā)情，用發(fā)情的雌鼠和雄鼠進(jìn)行交配，從而對(duì)雄性進(jìn)行相關(guān)性能力研究。HE染色顯示大鼠睪丸組織精曲小管結(jié)構(gòu)變化，采用免疫組化及免疫熒光追蹤移植細(xì)胞;免疫組化觀察3β-HSD1、17β-HSD3分泌情況，TUNEL免疫組化染色觀察大鼠間質(zhì)細(xì)胞凋亡指數(shù)。放射免疫法觀察大鼠血清睪酮含量。⑺采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，方差齊

20、時(shí)，多樣本均數(shù)比較均采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法;方差不齊時(shí)，多樣本均數(shù)比較均采用Welch法，兩兩比較采用Dunnett's T3方法，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：①腹股溝皮下筋膜結(jié)締組織內(nèi)的脂肪源干細(xì)胞具有長(zhǎng)梭形、多角形的形態(tài)學(xué)特征，可形成細(xì)胞集落，體外可以誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞。②體外Percoll分離法可成功分離培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞。間質(zhì)細(xì)胞呈多邊形、三角形。單層貼壁生長(zhǎng)，伸展后呈漩渦狀排列

21、，細(xì)胞以集落形式增殖;經(jīng)3β-HSD特異性染色鑒定，鏡下可見(jiàn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞被染成藍(lán)黑色而其他睪丸細(xì)胞不著色，睪丸間質(zhì)細(xì)胞純度可達(dá)到95％以上;MTT法顯示8g/L的D-gal模擬衰老模型細(xì)胞存活率為(81.96±0.96)，為最適濃度，可成功誘導(dǎo)leydig cell老化(F=8960.772，P=0.000);且隨時(shí)間延長(zhǎng)，8g/L的D-gal處理的LCs呈現(xiàn)G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少。③ADSCs上清中可以提取出ADSCs-C

22、M?？瞻讓?duì)照組、8g/LD-gal處理的Leydig cells組、8g/LD-gal處理的Leydig cells與ADSCs-CM共培養(yǎng)組做比較，三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1101.980，P＜0.001）。MTT檢測(cè)顯示其細(xì)胞活性有所提高(P＜0.001);流式細(xì)胞儀共培養(yǎng)24h后，細(xì)胞周期中G0/G1期細(xì)胞比例下降;空白對(duì)照組、8g/LD-gal處理的Leydig cells組、共培養(yǎng)組之間的SA-β-半乳糖酐酶陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)差

23、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1105.307，P＜0.001);共培養(yǎng)48h，SA-β-半乳糖酐酶染色，共培養(yǎng)組SA-β-半乳糖酐酶陽(yáng)性細(xì)胞減少(P＜0.001)，細(xì)胞衰老減輕;免疫組化觀察共培養(yǎng)后細(xì)胞分泌的3β-HSD分泌情況增加。④連續(xù)皮下注射D-gal可以模擬大鼠衰老?？瞻讓?duì)照組、D-gal處理組、ADSCs-移植組之間的CuZn-SOD(F=28.587，P＜0.001)、NO水平(F=56.571，P＜0.001)、血清IL-2水平(

24、F=23.667，P＜0.001)、脾臟指數(shù)（F=33.830，P＜0.001）和胸腺指數(shù)(F=15.847，P＜0.001)、MDA水平(F=45.468，P＜0.001)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。衰老模型組與空白對(duì)照組比較，血清MDA水平有所升高(P＜0.001)，血清CuZn-SOD(P＜0.001)、血清NO(P＜0.001)、IL-2水平(P＜0.001)以及脾臟指數(shù)(P＜0.001)、胸腺指數(shù)(P＜0.001)均有所降低，提示D-半

25、乳糖模擬亞急性大鼠衰老模型復(fù)制成功。與模型組比較，細(xì)胞治療后衰老大鼠SOD活性(P=0.04)、血清IL-2水平(P=0.038)、血清NO水平(P＜0.001)和胸腺指數(shù)(P=0.002)、脾臟指數(shù)(P=0.001)均有所升高，MDA水平則降低(P＜0.001)。⑤空白對(duì)照組、D-gal模型處理組、ADSCs-移植組之間的血清睪酮含量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=25.370,P＜0.001)，與空白對(duì)照組比較，模型組血清睪酮含量有所降低

26、(P＜0.001)，提示D-半乳糖亞急性大鼠衰老模型已復(fù)制成功。與模型組比較，細(xì)胞治療組血清睪酮含量有所升高(P=0.033)?？瞻讓?duì)照組、D-gal模型處理組、ADSCs-移植組之間的交配次數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=16.280，P＜0.001），與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠交配次數(shù)有所減少(P＜0.001)，提示D-半乳糖亞急性大鼠衰老模型復(fù)制成功。經(jīng)過(guò)移植細(xì)胞治療后，與模型組比較，細(xì)胞治療組交配次數(shù)有提高(P=0.027)。睪丸

27、間質(zhì)細(xì)胞分泌3β-HSD、17β-HSD增多，而TUNEL染色顯示睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡率降低(P＜0.001)。
　　 結(jié)論：⑴筋膜結(jié)締組織脂肪源干細(xì)胞具有長(zhǎng)梭形、多角形的形態(tài)學(xué)特征，可以形成細(xì)胞集落，與其它組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)顯著差別;細(xì)胞表面標(biāo)記物檢測(cè)中，4代貼壁ADSCs的特異性表面標(biāo)志物CD90、CD29表達(dá)率分別為90％以上，而CD49d、CD11b、CD45陰性表達(dá)，CD106弱表達(dá);該細(xì)胞經(jīng)定向誘導(dǎo)后可以成骨、成脂肪

28、，與間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化的功能一致。由此可以判斷在發(fā)育成熟大鼠的筋膜結(jié)締組織中存在未分化間充質(zhì)干細(xì)胞。⑵通過(guò)Percoll梯度離心的方法，可以獲取穩(wěn)定的高純度的睪丸間質(zhì)細(xì)胞;3β-HSD特異性染色，可以對(duì)其鑒定。⑶中濃度的D-gal誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，且可以保證細(xì)胞存活率。在高濃度環(huán)境下(16g/L)及中濃度(8g/L)的長(zhǎng)時(shí)間作用下，可以誘使睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡。⑷體外脂肪干細(xì)胞基質(zhì)與8g/L D-gal處理的睪丸間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)，可以明顯防護(hù)D

29、-半乳糖對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的損害，提高細(xì)胞活性，減少衰老細(xì)胞數(shù)目。促進(jìn)3β-HSD、17β-HSD的分泌，保護(hù)睪丸間質(zhì)細(xì)胞。⑸連續(xù)頸背部皮下注射D-gal可以有效模擬亞急性衰老模型。衰老大鼠在外觀上及自由基等方面，顯示顯著衰老征象。⑹尾靜脈移植脂肪源干細(xì)胞后，可顯著升高衰老大鼠體內(nèi)SOD含量、IL-2水平，而有效降低MDA含量，同時(shí)提高胸腺和脾臟指數(shù)。⑺移植脂肪源干細(xì)胞可以改善衰老老鼠的交配能力，促進(jìn)睪酮釋放，同時(shí)保護(hù)睪丸間質(zhì)細(xì)胞。綜上所述

30、，本研究分別采用了細(xì)胞分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化、動(dòng)物模型建立、HE染色和免疫組化、免疫熒光等技術(shù)手段，從血清學(xué)自由基及免疫功能方面，以及交配能力等多方面、多角度的探討了體內(nèi)移植外源性脂肪源干細(xì)胞對(duì)D-gal誘導(dǎo)的亞急性衰老大鼠的作用以及體外ADSCs-CM對(duì)D-gal處理的睪丸間質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用。同時(shí)，體外ADSCs-CM可以降低D-gal對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的毒性作用。本研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充外源性的脂肪源干細(xì)胞可以延緩D-gal誘導(dǎo)的衰老，提高其生命質(zhì)