柴胡屬植物化學(xué)成分和質(zhì)量控制研究及天目藜蘆化學(xué)成分研究.pdf

1、第一部分柴胡屬植物化學(xué)成分和質(zhì)量控制研究
　　 傘形科柴胡屬植物為一年生或多年生草本，主要分布于北半球尤其是歐亞大陸和非洲北部。本屬植物部分可作藥用，具解表里、疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉氣之功效，用于治療感冒發(fā)熱、寒熱往來、胸滿脅痛、口苦耳聾、頭痛目眩、月經(jīng)不調(diào)、子宮脫垂、脫肛等癥?！吨袊幍洹?010版收載北柴胡和狹葉柴胡的干燥根為中藥柴胡的植物來源。
　　 然而，目前柴胡品種混淆的現(xiàn)象多有存在，除藥典收載的正品柴胡外

2、，尚有多達(dá)10余種柴胡屬植物在各地區(qū)使用；甚至有毒的大葉柴胡也混入藥用柴胡中使用，并曾造成嚴(yán)重的中毒事件。
　　 本研究就柴胡屬植物中的有效成分和毒性成分進(jìn)行化學(xué)研究，闡明其有效成分和毒性成分；并建立全面的柴胡藥材質(zhì)量評價方法，為甄別柴胡“真?zhèn)蝺?yōu)劣”，解決柴胡品種混亂、用藥安全性提供科學(xué)依據(jù)。
　　 1.1北柴胡活性化學(xué)成分的研究
　　 應(yīng)用現(xiàn)代色譜手段對北柴胡的化學(xué)成分進(jìn)行了分離，并應(yīng)用化學(xué)及光譜學(xué)方法進(jìn)行了結(jié)

3、構(gòu)鑒定。共得到12個柴胡皂苷化合物。分別為：BC-1柴胡皂苷a BC-2柴胡皂苷dBC-3柴胡皂苷c BC-4柴胡皂苷b2BC-5柴胡皂苷b4 BC-6柴胡皂苷fBC-72"-O-乙酰柴胡皂苷a BC-83"-O-乙酰柴胡皂苷aBC-96"-O-乙酰柴胡皂苷a BC-103"-O-乙酰柴胡皂苷dBC-116"-O-乙酰柴胡皂苷d BC-122"-O-乙酰柴胡皂苷e
　　 1.2大葉柴胡毒性成分的化學(xué)研究
　　 大葉柴胡是

4、柴胡屬中的有毒植物，曾混入正品柴胡入藥導(dǎo)致人中毒死亡。本研究對大葉柴胡植物總提物及各萃取部位進(jìn)行毒性研究，發(fā)現(xiàn)二氯甲烷萃取部位是其毒性部位；應(yīng)用現(xiàn)代色譜手段對該萃取部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離，并應(yīng)用化學(xué)及光譜學(xué)方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，共得到22個化合物，其中17個為多炔類化學(xué)成分，并有10個為新化合物。此外，采用Mosher法確定了已知化合物柴胡毒素的絕對構(gòu)型。
　　 采用MTT法測試部分單體化合物對HL-60、A549、LOVO和PC-

5、3M等4種腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。研究發(fā)現(xiàn)，BL-8和BL-11的細(xì)胞毒活性較強(qiáng)，在100μg/ml時對4個腫瘤細(xì)胞株的抑制率均達(dá)100％；尤其是對HL-60細(xì)胞株有較高的敏感性，其IC50值分別為2.82和1.27μg/ml。
　　 BL-1*（2E，4E，8E，10E）-Heptadecatetraene-6-YN-1-yl acetato
　　 BL-2*（2E，4E，92）-Heptadecatriene-6-y

6、n-1-yl acetate
　　 BL-3*（2E，4E，9Z）-Octadecatriene-6-yne-1，18-diyl diacetate
　　 BL-4*（2E，4E，9Z）-1-Hydroxyoctadecatriene-6-yn-18-yl aoctato
　　 BL-5*（2E，4E，9Z）-Octadecatriene-6-yne-1，18-diol
　　 BL-6*（2Z，BE，10

7、E）-Pentadecatriene-4，6-diyn-1-ol
　　 BL-7*（2Z，9Z）-Octadecadiene-4，6-diyne-1，18-diol
　　 BL-8*（2Z，8E，10E）-14S-Hydroxyheptadecatriene-4，6-diyn-1-yl acetate
　　 BL-9*（2Z，SZ，10E）-Heptadecatriene-4，6-diyne-1，14-diol<

8、br>　　 BL-10*（2Z，8Z，10E）-1-Hydroxyhcptadecatriene-4，6-diyn-14-yl acetate
　　 BL-11柴胡毒素
　　 BL-12乙酰柴胡毒素
　　 BL-13柴胡醇酮
　　 BL-14柴胡炔醇
　　 BL-15（22，92）-Heptadecadiene-4，6-diyn-1-ol
　　 BL-16（2Z，9Z）-Pentadec

9、adiene-4，6-diyn-1-ol
　　 BL-17（7E，9E，15E）-17-Hydeoxy-heptadecadiene-11，13-diyn-4-one
　　 BL-18硬脂酸
　　 BL-19正-二十八酸
　　 BL-20正-四十五酸
　　 BL-21豆甾醇
　　 BL-22β-谷甾醇
　　 1.3柴胡皂苷的鑒別與表征
　　 研究建立了柴胡皂苷的HPLC-D

10、AD-ESI/MSn定性分析方法，對柴胡屬植物中的柴胡皂苷進(jìn)行鑒別與表征。本研究選取12個已知柴胡皂苷作為對照品，通過對它們的ESI-MSn數(shù)據(jù)進(jìn)行分析總結(jié)出三種類型的柴胡皂苷的裂解規(guī)律，并進(jìn)一步應(yīng)用總結(jié)出的裂解規(guī)律，結(jié)合UV譜與色譜保留行為，對狹葉柴胡提取物進(jìn)行多級質(zhì)譜和物質(zhì)基礎(chǔ)研究，初步推斷了75個柴胡皂苷化合物的結(jié)構(gòu)。該法首次實現(xiàn)了柴胡皂苷的在線檢測，為全面認(rèn)識柴胡屬植物中的柴胡皂苷及柴胡質(zhì)量控制研究提供了重要的依據(jù)。
　　

11、 1.4柴胡皂苷的定量分析方法研究
　　 研究建立了一種高效的RRLC-ELSD方法同時定量柴胡中的6個柴胡皂苷的含量。該法在12分鐘內(nèi)實現(xiàn)柴胡皂苷的快速分離，分析時間為傳統(tǒng)的HPLC方法的1/4。由于柴胡皂苷結(jié)構(gòu)紫外吸收弱，故采用ELSD檢測器進(jìn)行檢測。對所建立的方法進(jìn)行了線性、精密度、加樣回收率等方法學(xué)考察，結(jié)果表明，此方法快速、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。同時，采用該法對23個柴胡植物樣品共11個不同柴胡品種中柴胡皂苷進(jìn)行分析

12、。研究發(fā)現(xiàn)，柴胡皂苷在23個不同柴胡樣品中的分布和含量差異較大，尤其是來源于黑柴胡、錐葉柴胡和小葉黑柴胡的樣品的與正品柴胡的化學(xué)組成具有明顯的不同，故不能將其作為柴胡的替代品入藥。本研究方法適用于中藥柴胡的質(zhì)量控制，也可為植物來源的鑒別提供科學(xué)依據(jù)。
　　 1.5柴胡多炔類成分的定性和定量分析方法研究
　　 大葉柴胡中的主要毒性成分為多炔類化合物。研究建立了一種HPLC-DAD-MS方法對27個不同來源的的柴胡屬植物中9

13、個毒性成分多炔類化合物進(jìn)行定性和定量分析。對所建立的方法進(jìn)行了線性、精密度、加樣回收率等方法學(xué)考察，結(jié)果表明，此法快速、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。研究發(fā)現(xiàn)，多炔類成分在不同來源的柴胡樣品中的分布和含量差異較大，有毒的大葉柴胡中多炔類成分的含量較高，雖然正品柴胡中沒有檢測到任何多炔類成分的存在，但是在一些常見市場混淆品種中檢測到多炔類成分的存在。因此，為限制有毒大葉柴胡及混淆品種混入藥用柴胡中使用，確保柴胡用藥的安全性，我們認(rèn)為在今后的藥典標(biāo)

14、準(zhǔn)中應(yīng)當(dāng)引入多炔類成分的檢測項，將其作為中藥柴胡質(zhì)量控制的不可或缺的內(nèi)容之一。此部分內(nèi)容的研究結(jié)果在國內(nèi)外尚未見報道。
　　 1.6中藥柴胡的指紋圖譜研究
　　 研究建立了中藥柴胡的多元檢測指紋圖譜方法。通過HPLC-ELSD及HPLC-DAD法展開柴胡植物中的有效成分柴胡皂苷和毒性成分多炔類化合物的化學(xué)分析，建立正品柴胡的標(biāo)準(zhǔn)色譜指紋圖譜，并將其他的市場常見混淆柴胡品種與之比較，通過主成分分析和相似度分析，實現(xiàn)不同來源

15、柴胡屬植物的物質(zhì)基礎(chǔ)的綜合對比。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，銀州柴胡與正品柴胡無論在成分的組成和含量上都極為相似，盡管仍需進(jìn)一步的藥理學(xué)研究證實，銀州柴胡可能為正品柴胡的替代品種；而黑柴胡與正品柴胡在有效成分的組成和含量上差異較大，且含有少量的多炔類成分，故不能作為柴胡的替代品使用；大葉柴胡含有豐富的多炔類成分，具有特殊的指紋圖譜，有毒不可藥用。該指紋圖譜方法可為快速鑒別柴胡屬植物的來源提供重要的化學(xué)信息，并為中藥柴胡的用藥安全及質(zhì)量穩(wěn)定可控提供科學(xué)

16、依據(jù)。
　　 第二部分天目藜蘆化學(xué)成分研究
　　 藜蘆為百合科藜蘆屬植物中藜蘆的全草，中醫(yī)用藜蘆、興安藜蘆、天目藜蘆等的根和根莖共同入藥，用于中風(fēng)痰壅，癲癇、喉痹不通，疥癬。
　　 本課題組開展了中國藜蘆屬植物的系統(tǒng)研究工作，對藜蘆、興安藜蘆、狹葉藜蘆、毛穗藜蘆等進(jìn)行化學(xué)研究，并取得了一定的研究成果。研究發(fā)現(xiàn)藜蘆屬植物中不同種間成分分布各不相同。目前，對天目藜蘆的化學(xué)研究工作還非常不足，有必要進(jìn)一步深入研究，闡明

17、其化學(xué)成分物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 天目藜蘆化學(xué)成分的研究
　　 本文應(yīng)用現(xiàn)代色譜手段對天目藜蘆的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離，并應(yīng)用化學(xué)及光譜學(xué)方法進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，共鑒定了36個化合物的結(jié)構(gòu)，其中兩個為新化合物。分別為：TL-1*（Z）-4-甲氧基-6，4'-雙羥基噢弄 TL-2*6，8，9-三羥基-二氫茶螺烷TL-3棋盤花堿 TL-4棋盤花辛堿TL-5計明堿 TL-63-當(dāng)歸酰計明堿TL-73，15-雙當(dāng)歸酰計明堿 TL-8計莫