非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的臨床特征與分子生物學(xué)標(biāo)記的研究.pdf

1、第一部分:非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素及腦預(yù)防照射價(jià)值的研究
　　目的：
　　非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率存在著巨大的變化，這引起了腦預(yù)防照射價(jià)值的不確定性，一些臨床病理特征可能與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率相關(guān)，但是哪些臨床病理特征與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān)是不確定的。為此我們進(jìn)行了這項(xiàng)研究，來(lái)系統(tǒng)的調(diào)查影響非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素和腦預(yù)防照射對(duì)腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率及對(duì)患者生存期的影響，以期為臨床非小細(xì)胞肺癌的腦預(yù)防照射及非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移特征的進(jìn)一

2、步研究提供參考。
　　材料與方法：
　　根據(jù)我們的研究標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)自1978年1月1日至2013年6月30日公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn)進(jìn)行了檢索，最終獲取符合研究標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)，提取相關(guān)數(shù)據(jù)，得到各研究中針對(duì)不同研究因素的效應(yīng)值，使用以卡方檢驗(yàn)為基礎(chǔ)的Q檢驗(yàn)分析各研究間的異質(zhì)性，并以I2表示各研究的異質(zhì)性大小，之后根據(jù)各研究間異質(zhì)性的大小選擇固定效應(yīng)模型或隨機(jī)效應(yīng)模型對(duì)各研究的效應(yīng)值進(jìn)行合并meta分析。為評(píng)價(jià)meta分析結(jié)果的可靠性，使用基于

3、Begg檢驗(yàn)為基礎(chǔ)的漏斗圖和Egger檢驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)各研究之間是否存在發(fā)表偏倚。對(duì)于不適合進(jìn)行效應(yīng)值合并者，采用描述性的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)其結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)我們的研究標(biāo)準(zhǔn)，最終得到13項(xiàng)關(guān)于腦轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)因素的研究和6項(xiàng)關(guān)于腦預(yù)防照射價(jià)值的隨機(jī)對(duì)照研究。這兩方面的研究分別登記了3182例病人和1237例病人。在研究中，我們對(duì)組織學(xué)類(lèi)型及性別、年齡等因素與腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及腦預(yù)防照射對(duì)腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率的影響的效應(yīng)進(jìn)行了合并me

4、ta分析。結(jié)果顯示，鱗癌相對(duì)非鱗癌與低的腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān)(p=0.000，pooled OR=0.47，95％CI=0.34-0.65);而腺癌相對(duì)于非腺癌及性別、年齡與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生不相關(guān)(p＞0.05);腦預(yù)防照射可以降低非小細(xì)胞肺癌肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率(p=0.000，pooled OR=0.34，95％CI=0.23-0.50);描述性的統(tǒng)計(jì)方法傾向于血清癌胚抗原水平與腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生相關(guān);并且對(duì)于早期階段非小細(xì)胞肺癌，早的分期與低的腦

5、轉(zhuǎn)移發(fā)生率相關(guān);而腦預(yù)防照射未為患者帶來(lái)生存方面的獲益。漏斗圖和Egger檢驗(yàn)顯示納入meta分析的研究不存在發(fā)表偏倚(p＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.鱗狀細(xì)胞癌相對(duì)于非鱗狀細(xì)胞癌是非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的有意義的保護(hù)因素。
　　2.性別、年齡、組織學(xué)分類(lèi)（按腺癌和非腺癌分類(lèi)）等對(duì)腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率沒(méi)有明顯影響;
　　3.對(duì)于早期階段非小細(xì)胞肺癌，早的分期與低的腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率相關(guān);
　　4.血清癌胚抗原水平可用

6、于預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生，但其分界值需要進(jìn)一步研究;
　　5.目前研究尚不能支持吸煙、一般狀況評(píng)分、初始治療的反應(yīng)等因素對(duì)非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移有何影響;
　　6.腦預(yù)防照射可以降低非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率，但并未為患者帶來(lái)生存上的獲益。
　　第二部分:miRNA-328、miRNA-378對(duì)可手術(shù)的局部晚期非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值及機(jī)制的研究
　　目的：
　　介于臨床病理特征在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)

7、移方面的局限性和腫瘤的固有分子生物學(xué)特征決定了非小細(xì)胞肺癌在腦轉(zhuǎn)移方面的巨大差異，從分子生物學(xué)角度尋找可用于非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)指標(biāo)，無(wú)疑將為非小細(xì)胞肺癌的腦預(yù)防照射提供指導(dǎo)。腫瘤組織中的miRNA-328、miRNA-378在先前以小樣本的臨床病例為基礎(chǔ)的miRNA測(cè)序研究中被發(fā)現(xiàn)與非小細(xì)胞肺癌的腦轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但缺乏大樣本的特征性臨床病例的支持，為此我們進(jìn)行這項(xiàng)以特征性的大樣本的臨床病例為基礎(chǔ)的臨床研究，探索病人腫瘤組織中miR

8、NA-328、miRNA-378表達(dá)在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移方面的預(yù)測(cè)價(jià)值，并從臨床角度探索其機(jī)制。
　　材料和方法：
　　1.制定病例的納入和剔除標(biāo)準(zhǔn)，然后根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)對(duì)2010年1月1日至2011年10月31日期間接受手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌病例進(jìn)行篩選，得到符合研究要求的特征性臨床病例;
　　2.對(duì)于符合標(biāo)準(zhǔn)的病例，對(duì)其進(jìn)行定期隨訪，獲得其生存相關(guān)數(shù)據(jù);并根據(jù)隨訪期內(nèi)是否發(fā)生腦轉(zhuǎn)移分為腦轉(zhuǎn)移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組，對(duì)于隨訪期

9、內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的病例將其分為腦轉(zhuǎn)移組和非腦轉(zhuǎn)移組，并對(duì)其臨床病理特征進(jìn)行比較，之后進(jìn)行下一步研究;
　　3.用壽命表法計(jì)算全組病人、腦轉(zhuǎn)移組病人及非腦轉(zhuǎn)移組病人的總生存率、無(wú)病生存率及中位生存期，同時(shí)計(jì)算腦轉(zhuǎn)移組病人腦轉(zhuǎn)移發(fā)生的中位時(shí)間、1年和2年腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率及腦轉(zhuǎn)移后的生存率和中位生存期;用Kaplan-Meier法比較腦轉(zhuǎn)移組和非腦轉(zhuǎn)移組病人總生存率和無(wú)病生存率的差異;從而得到這組病人的生存特征的數(shù)據(jù);
　　4.獲取腦轉(zhuǎn)

10、移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病例的石蠟標(biāo)本，用RT-PCR法檢測(cè)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織及癌旁組織、未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達(dá)情況，之后對(duì)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織與癌旁組織、腦轉(zhuǎn)移組與未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達(dá)情況進(jìn)行比較，得到腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;
　　5.獲取腦轉(zhuǎn)移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人的石蠟

11、標(biāo)本，用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)其腫瘤組織中N-cadherin、E-cadherin、VEGF、PRKCA、S100B等蛋白的表達(dá)情況，之后對(duì)兩組病人上述蛋白的表達(dá)情況分別進(jìn)行比較（x2檢驗(yàn)），得到腫瘤組織中N-cadherin、E-cadherin、VEGF、PRKCA、S100B等蛋白的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;
　　6.對(duì)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達(dá)情況和上述與腦轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表

12、達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)（等級(jí)相關(guān)）分析，初步探索miRNA-328、miRNA-378促進(jìn)腦轉(zhuǎn)移的機(jī)制;
　　7.多因素分析（logistic回歸）全組病人的性別、年齡、病理類(lèi)型、T分期、N分期、術(shù)后放療等臨床病理特征與腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.根據(jù)納入和剔除標(biāo)準(zhǔn)，我們最終得到符合標(biāo)準(zhǔn)的病例86例，其隨訪期均超過(guò)了2年，在隨訪期內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的

13、63例，其中腦轉(zhuǎn)移23例;腦轉(zhuǎn)移組(23例)與非腦轉(zhuǎn)移組（40例）比較、腦轉(zhuǎn)移組（23例）與未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組（63例）比較在臨床病理特征方面均無(wú)顯著差異;
　　2.符合標(biāo)準(zhǔn)病例的生存特征數(shù)據(jù):全組病例隨訪期內(nèi)死亡47例，其2年總生存率58％，3年總生存率43％，2年無(wú)病生存率37％，3年無(wú)病生存率27％，中位生存期32個(gè)月;腦轉(zhuǎn)移組病例2年生存率為35％，2年無(wú)病生存率0，中位生存期20個(gè)月;非腦轉(zhuǎn)移組病例2年生存率47％，2年無(wú)病

14、生存率21％，中位生存期為23個(gè)月;兩組病例無(wú)病生存率和總生存率比較，均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，x2=15.173、P=0.000和x2=4.288、P=0.038;對(duì)于發(fā)生腦轉(zhuǎn)移的病人，腦轉(zhuǎn)移發(fā)生的中位時(shí)間是10個(gè)月，1年內(nèi)腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率78.26％，2年內(nèi)腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率100％;腦轉(zhuǎn)移后的1年生存率38％，中位生存期10個(gè)月;
　　3.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值分別為:1.152±0.3

15、83、1.104±0.302;癌旁組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值分別為:0.673±0.296、0.683±0.287，兩組比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p值分別為:0.000、0.000。未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值分別為:0.797±0.330、0.784±0.295，與腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的2-△△Ct值相比較，兩

16、組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達(dá)均有顯著性差異，p值分別為:0.000、0.000。
　　4.對(duì)于腦轉(zhuǎn)移組和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人，S100B、N-cadherin僅在個(gè)別病人的腫瘤組織細(xì)胞漿或/和細(xì)胞膜上有散在的表達(dá)，而E-cadherin在幾乎所有病人的腫瘤組織細(xì)胞漿和細(xì)胞膜上均呈中至高強(qiáng)度性表達(dá)，但上述三種蛋白在兩組病人腫瘤組織中的表達(dá)均無(wú)顯著差異（p值分別為1.000、0.890、0.200）;VEG

17、F在大部分病人的腫瘤組織細(xì)胞漿中均有輕至中等強(qiáng)度的表達(dá)，但其在兩組病人腫瘤組織中的表達(dá)也無(wú)顯著差異(p=0.510);而PRCKA在腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組的病人腫瘤組織中的表達(dá)(p=0.010)。
　　5.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328表達(dá)與PRKCA表達(dá)明顯相關(guān)，r=0.591，p值為0.003;而腫瘤組織中miRNA-378表達(dá)與PRKCA表達(dá)不相關(guān)，r=0.259，p值為0.232。

18、r>　　6.多因素分析臨床病理特征與病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的關(guān)系顯示:腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達(dá)是非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的有意義的危險(xiǎn)因素，OR值分別為:8.806、17.915，p值分別為:0.013、0.007;而性別、年齡、病理類(lèi)型、T分期、N分期、術(shù)后放療等因素對(duì)腦轉(zhuǎn)移無(wú)影響。
　　結(jié)論：
　　1.全組病人2年、3年總生存率、無(wú)病生存率及中

19、位生存期等數(shù)據(jù)均較文獻(xiàn)報(bào)道略好;而腦轉(zhuǎn)移組病人的總生存率和無(wú)病生存率均較非腦轉(zhuǎn)移組差;腦轉(zhuǎn)移組腦轉(zhuǎn)移發(fā)生時(shí)間及腦轉(zhuǎn)移后的生存率等數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道相似;因此該組病例有良好的臨床代表性。
　　2.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378的表達(dá)水平均明顯高于腦轉(zhuǎn)移組病人癌旁組織和未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中的表達(dá)水平，顯示了良好的敏感性和特異性，故腫瘤組織中miRNA-328、miRNA-378表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移

20、相關(guān)。
　　3.腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中PRKCA的表達(dá)強(qiáng)度明顯強(qiáng)于未出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移組病人腫瘤組織中的表達(dá)強(qiáng)度，而S100B、N-cadherin、E-cadherin、VEGF等在兩組病人腫瘤組織中的表達(dá)無(wú)顯著差異，故可認(rèn)為非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織中PRKCA的表達(dá)與其腦轉(zhuǎn)移明顯相關(guān);
　　4.腫瘤組織中miRNA-328對(duì)非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的影響與腫瘤組織中PRKCA表達(dá)相關(guān);而腫瘤組織中miRNA-378對(duì)非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的影