ESA聯(lián)合STAg滴鼻免疫小鼠誘導的弓形蟲特異性黏膜及系統(tǒng)免疫應答.pdf

1、目的：觀察弓形蟲排泄分泌抗原(excreted/secretedantigens，ESA)與可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen，STAg)聯(lián)合滴鼻免疫小鼠誘導的黏膜及系統(tǒng)免疫應答的能力，探討其誘導免疫應答的機制，為弓形蟲黏膜疫苗復合抗原的篩選提供初步的理論和實驗依據(jù)。 方法：本實驗分三部分：第一部分觀察弓形蟲感染小鼠不同時間從腹水中獲取的ESA滴鼻免疫小鼠誘導黏膜和系統(tǒng)免疫應答的效果，確定獲取ES

2、A的適宜時間。分別用弓形蟲感染第0h、6h、12h、24h、36h、48h和60h無菌收集的腹腔液中獲取的ESA以20μg/只或PBS以20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次，間隔14天。觀察小鼠狀況并記錄體重，末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠，ELISA法檢測血清弓形蟲特異性IgG、小腸沖洗液sIgA抗體水平，分離脾淋巴細胞、腸上皮內淋巴細胞(intestinalintraepitheliallymphocytes，iIEL)及腸系膜淋

3、巴結淋巴細胞(mesentericlymphnodelymphocytes，MLNL)并計數(shù)。 第二部分觀察以不同劑量弓形蟲感染小鼠48h獲取的ESA滴鼻免疫小鼠誘導黏膜及系統(tǒng)免疫應答的效果，確定合適的ESA鼻內接種劑量。分別用5μg、10μg、20μg和30μgESA/只或PBS20μl/只滴鼻免疫8只小鼠2次，間隔14天。觀察小鼠狀況，于末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠，ELISA法檢測鼻咽沖洗液弓形蟲特異性sIgA、小腸

4、沖洗液sIgA、血清IgG抗體水平，分離iIEL和MLNL及脾淋巴細胞并計數(shù)。 第三部分觀察弓形蟲排泄分泌抗原與可溶性速殖子抗原聯(lián)合或單獨滴鼻免疫小鼠誘導黏膜及系統(tǒng)免疫應答的效果，篩選弓形蟲復合黏膜疫苗候選抗原成分。分別用30μgESA、20μgSTAg、25μg聯(lián)合抗原(15μgESA加10μgSTAg)/只或PBS20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次，間隔14天。觀察小鼠健康狀況并記錄體重，于末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠

5、，ELISA法檢測小腸沖洗液弓形蟲特異性sIgA、血清IgG抗體水平，分離iIEL和脾淋巴細胞并計數(shù)。 結果不同時相ESA滴鼻免疫小鼠后，除60h組外，其它實驗組及PBS組小鼠健康狀況良好，體重變化隨時間均呈現(xiàn)上升趨勢。60h組小鼠狀態(tài)欠佳，體重增長較其它實驗組及PBS組緩慢(P＜0.05)。實驗組血清和黏膜特異性抗體水平升高，MLNL、iIEL和脾淋巴細胞發(fā)生增殖性應答。48h組和60組血清IgG、小腸沖洗液sIgA水平及iI

6、EL、MLNL和脾淋巴細胞數(shù)量均明顯高于除36h組外的其他實驗組及PBS組(P＜0.01)。36h組小腸沖洗液sIgA水平及MLNL數(shù)量明顯高于0h組和PBS組(P＜0.05)。 不同劑量ESA滴鼻免疫小鼠后，各組小鼠健康狀況良好。隨鼻內免疫ESA劑量的增加，實驗組特異性抗體水平不同程度的升高，MLNL、iIEL及脾淋巴細胞也發(fā)生不同程度的增生性應答。30μg組小鼠血清IgG(P＜0.01)、脾淋巴細胞數(shù)量(P＜0.05)明顯高

7、于10μg組、5μg組及PBS組，20μg組血清IgG明顯高于PBS組(P＜0.05)；30μg組小腸沖洗液sIgA(P＜0.01)、鼻咽沖洗液sIgA(P＜0.05)、iIEL和MLNL數(shù)量(P＜0.01)、20μg組小腸沖洗液sIgA(P＜0.01)及MLNL數(shù)量(P＜0.05)顯著高于5μg組及PBS組。 ESA與STAg聯(lián)合或單獨滴鼻免疫小鼠后，小鼠健康狀況良好，各組小鼠體重隨時間變化呈增高趨勢。STAg組、ESA組及聯(lián)

8、合抗原組小鼠黏膜、血清中特異性抗體水平依次升高，脾淋巴細胞和iIEL增殖反應依次增強。聯(lián)合抗原組和ESA組小腸沖洗液sIgA(P＜0.05)和血清IgG升高(P＜0.05)尤為顯著；同時，聯(lián)合抗原組(P＜0.01)、ESA組(P＜0.05)脾淋巴細胞和iIEL增生顯著高于PBS組。 結論36h、48h和60hESA滴鼻免疫均能誘導黏膜及系統(tǒng)免疫應答，60hESA可能對機體有損害作用，不適宜直接滴鼻免疫，48hESA可用于進一步研