1,25-(OH)2D3對環(huán)境變應原誘導臍血CD4+T細胞IL-13、IL-17表達的影響.pdf

1、研究背景：
　　支氣管哮喘是兒童時期最常見的慢性呼吸道疾病，發(fā)病機制復雜目前仍不完全清楚，其患病率在全球范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢。目前大多數(shù)學者認為，Th1/Th2的比例和功能失衡是引起哮喘等變應性疾病發(fā)病率明顯上升的重要原因[1]。盡管任何個體接觸致敏原后均有發(fā)生過敏癥的可能，但研究[2,3]發(fā)現(xiàn)生命早期過敏體質(zhì)的形成與否與多因素有關(guān)，如胎兒的特異性免疫和潛在的抗原暴露；母親的特異性免疫和妊娠期生活習慣；免疫調(diào)節(jié)的衛(wèi)生假說與小兒早期

2、喂養(yǎng)的干預等等。然而，人體在生命早期對母體和外界即具有獨立有效的免疫反應，因此變態(tài)反應性疾病的基礎預防應從生命早期就應予以足夠重視。
　　國內(nèi)對哮喘的一級預防仍然處于起步探索階段，近年來應用營養(yǎng)素來預防哮喘等變態(tài)性疾病可能是一種潛在的有效治療方法，是目前研究的熱點之一。1,25-(OH)2D3是維生素D在體內(nèi)的活性形式，除具有調(diào)控鈣、磷代謝和骨穩(wěn)態(tài)等經(jīng)典作用之外，還參與宿主防御，炎癥，免疫調(diào)節(jié)和修復等一系列病理生理過程[4]。近年

3、來大量流行病學資料顯示，生命早期維生素D缺乏與后期哮喘的發(fā)病存在一定的關(guān)聯(lián)。有研究[5,6]表明，母親孕期維生素 D的攝入不足及臍血中1,25-(OH)2D3水平越低，日后小兒呼吸道感染及喘息性疾病的患病風險越高。由此可見，對于環(huán)境變應原如何影響新生兒T細胞分化和功能，同時維生素D對哮喘早期防治的具體機制及臨床合理應用仍不完全清楚，因此，有關(guān)維生素D參與哮喘等變態(tài)反應性疾病發(fā)生發(fā)展機制的相關(guān)研究顯得尤為必要。
　　研究目的：

4、>　　本研究通過檢測生命早期環(huán)境變應原卵清蛋白（OVA）、脂多糖（LPS）、β-乳球蛋白（β-LG）對臍血CD4+T細胞IL-13、IL-17表達的影響及1,25-(OH)2D3對其表達的作用，進一步探討早期變應原致敏的可干預環(huán)節(jié)，對維生素D的臨床合理應用及其對哮喘等變態(tài)反應性疾病的防治提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　篩選2011年11月-2012年6月我院正常順產(chǎn)的足月新生兒36例，根據(jù)不同的變應原刺激分為OVA組、L

5、PS組、β-LG組，每組各12例；新生兒斷臍后立即取胎盤端臍靜脈血50ml，采用密度梯度離心法分離臍血單個核細胞(CBMC)，磁珠分選CBMC中的CD4+T細胞，每組CD4+T細胞又同時予以下三種處理：自然狀態(tài)即空白刺激，相應的變應原單獨刺激，各變應原+1,25-(OH)2D3共刺激，培養(yǎng)72小時后采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、Real Time-PCR技術(shù)分別檢測培養(yǎng)上清液中IL-13、IL-17水平和CD4+T細胞中I

6、L-13 mRNA、IL-17 mRNA表達情況。
　　研究結(jié)果：
　　1.卵清白蛋白（OVA）組
　　（1）細胞培養(yǎng)上清液中IL-13水平：OVA單獨刺激后IL-13水平[（54.53±4.89） pg/ml]明顯高于空白刺激[（37.90±6.28） pg/ml](P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其水平[（45.24±3.52）pg/ml]較OVA單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（

7、P<0.01）。
　　（2）細胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平：OVA單獨刺激后IL-17水平[（22.92±2.22） pg/ml]明顯高于空白刺激[（17.97±1.77） pg/ml](P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其水平[（19.99±1.84）pg/ml]較OVA單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.05）。
　?。?） CD4+T細胞中IL-13 mRNA表達：與空白刺激相比，

8、OVA單獨刺激后IL-13mRNA表達（6.41±0.20）明顯增高(P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其表達（3.25±0.18）較OVA單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　?。?） CD4+T細胞中IL-17 mRNA表達：與空白刺激相比，OVA單獨刺激后IL-17mRNA表達（2.68±0.09）明顯增高(P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其表達（1.79±0.

9、06）較OVA單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　　2.脂多糖（LPS）組
　　（1）細胞培養(yǎng)上清液中IL-13水平：LPS單獨刺激后IL-13水平[（52.56±3.36） pg/ml]明顯高于空白刺激[（41.02±3.85） pg/ml](P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其水平[（48.04±1.38）pg/ml]較LPS單獨刺激降低（P<0.05），但均值仍高于空白

10、刺激（P<0.01）。
　?。?）細胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平：LPS單獨刺激后IL-13水平[（24.49±2.50） pg/ml]明顯高于空白刺激[（18.69±1.19） pg/ml](P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其水平[（21.65±1.46）pg/ml]較LPS單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　　（3） CD4+T細胞中IL-13 mRNA表達：與空白刺激

11、相比，LPS單獨刺激后IL-13mRNA表達（9.07±0.38）表達明顯增高(P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其表達（5.51±0.34）較LPS單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　　（4） CD4+T細胞中 IL-17 mRNA表達：與空白刺激相比，LPS單獨刺激IL-17mRNA表達（3.13±0.10）明顯增高(P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激（1.97±

12、0.15）其表達較LPS單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　　3.β-乳球蛋白（β-LG）組：
　?。?）細胞培養(yǎng)上清液中IL-13水平：β-LG單獨刺激后IL-13水平[（51.87±4.34） pg/ml]明顯高于空白刺激[（41.41±2.81） pg/ml](P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其水平[（46.39±3.50） pg/ml]較β-LG單獨刺激降低（P<0

13、.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　?。?）細胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平：β-LG單獨刺激后IL-17水平[（18.49±2.67） pg/ml]明顯高于空白刺激[（14.00±2.09） pg/ml](P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激其水平[（16.18±2.19） pg/ml]較β-LG單獨刺激降低（P<0.05），但均值仍高于空白刺激（P<0.05）。
　?。?）CD4+T細胞中IL-

14、13 mRNA表達：與空白刺激相比，β-LG單獨刺激后IL-13mRNA表達（7.11±0.20）明顯增高(P<0.01)；加用1,25-(OH)2D3刺激（5.30±0.20）其表達較β-LG單獨刺激降低（P<0.01），但均值仍高于空白刺激（P<0.01）。
　　（4）CD4+T細胞中IL-17 mRNA表達：與空白刺激相比，β-LG單獨刺激后IL-17mRNA表達（3.25±0.05）明顯增高(P<0.01)；加用1,25-