在青春期前和青春期后的小鼠卵巢發(fā)育中利用深度測序發(fā)現(xiàn)和分析miRNAs以及mir-484的功能特性.pdf

1、本研究分為二部分：
　　1、小鼠出生后卵巢不同發(fā)育時期和超數(shù)排卵期間miRNAs的鑒定
　　小的非編碼RNAs，也稱作MicroRNAs，它們在廣泛的組織中也包括卵巢，通過序列互補在轉(zhuǎn)錄后水平對基因的表達調(diào)控起重要作用。這些miRNAs可能會在轉(zhuǎn)錄水平嚴格的調(diào)控卵巢發(fā)育和卵泡發(fā)育過程中的許多基因。因此，鑒定特殊組織中的miRNAs可以為進一步了解miRNAs在不同生物學過程中的作用奠定基礎(chǔ)。為了探討miRNAs在卵巢發(fā)育和卵

2、泡發(fā)育過程中的作用，利用Illumina深度測序技術(shù)檢測了8個不同樣本的miRNAs序列庫。選擇不同發(fā)育時期的卵巢來檢測miRNAs在通過對小鼠注射或者不注射PMSG或者hCG獲得的不同發(fā)育階段的性腺中的表達模式
　　從大規(guī)模的測序reads（一次測序中儀器讀取的核苷酸長度）去除質(zhì)量較低的reads后挑選16-26bp的reads進行差異表達分析和新miRNA的批注。不同發(fā)育時期卵巢中miRNAs的表達分析結(jié)果顯示一些miRNAs

3、在卵巢發(fā)育的特定時期差異表達，而另一些則普遍表達。所有的差異表達miRNAs中我們發(fā)現(xiàn)有61種miRNAs在不同發(fā)育階段卵巢表達的倍數(shù)變化在2以上。在上調(diào)的miRNAs中mmu-miR-1298的變化倍數(shù)4.025是最高的，而mmu-miR-150則下調(diào)了3倍以上。此外，利用7種不同的靶基因預測軟件(DIANA-mT, miRanda, miRDB，miRWalk，RNAhybrid，PICTAR5，TargetScan)，發(fā)現(xiàn)了20種

4、差異表達miRNAs的2659個靶基因。對這些靶基因進行分析后發(fā)現(xiàn)了一些卵巢特異性的基因可以是一個或者多個miRNAs的靶基因。再者，通路注釋和基因本體論表明這些miRNAs參與基本的細胞過程。
　　這些結(jié)果顯示在出生后卵巢發(fā)育和超數(shù)排卵的不同階段存在著不同的miRNAs。利用生物信息學工具可以闡明這些miRNAs在卵巢發(fā)育和超數(shù)排卵過程中在不同通路、生物學功能和細胞成分中的潛在調(diào)控作用。結(jié)果為進一步分析miRNAs以及它們在卵巢

5、發(fā)育和超數(shù)排卵中的特定作用奠定基礎(chǔ)。此外，現(xiàn)有研究也為單個miRNA在卵巢發(fā)育和雌性受精過程中的鑒定和功能驗證提供基礎(chǔ)
　　2、小鼠顆粒細胞中microRNA-484介導轉(zhuǎn)錄后基因的調(diào)控
　　在卵巢生長和卵泡發(fā)育過程中許多卵泡會發(fā)生閉鎖，最終只有少量卵泡能夠完成排卵。研究表明卵泡閉鎖主要是由顆粒細胞凋亡引起，但是顆粒細胞發(fā)生凋亡的分子機制還不是很清楚。因此，為了研究顆粒細胞在轉(zhuǎn)錄后修飾的分子機制，首先利用qRT-PCR檢測了