谷氨酰胺對巨噬細胞炎癥因子分泌的影響.pdf

1、目的：研究谷氨酰胺體外和體內(nèi)作用時對巨噬細胞炎癥反應(yīng)的影響，探討谷氨酰胺的免疫調(diào)節(jié)機制，為臨床上給膿毒癥患者合理應(yīng)用谷氨酰胺提供實驗依據(jù)。 方法： 一、體外實驗 體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞株RAW264.7 ，分成Gln 0 Mm、0.5Mm、8 Mm 三組。37 ℃孵育1 h 后，加入100 ng/ml LPS 刺激，分別于0、1、4、12、24 h 收集細胞及上清液，用ELISA 方法檢測細胞上清液TNF-a、

2、IL-6、IL-10 濃度；在LPS 刺激4h 后，蛋白免疫印跡法檢測細胞HSP72 表達。 二、體內(nèi)實驗 昆明小鼠90 只，隨機分為假手術(shù)組(CON)、手術(shù)組(CLP)、谷氨酰胺組(GLN)。CLP和GLN 組采用盲腸結(jié)扎穿孔法制備膿毒癥模型，術(shù)后即刻尾靜脈注射Gln 0.75g/kg（GLN 組）或等量生理鹽水（CLP組）。6h 后采血收集血清，腹腔灌洗分離巨噬細胞，ELISA 法測定巨噬細胞裂解液、血清中TNF-a

3、、IL-6、IL-10的濃度；RT-PCR 測定巨噬細胞TNF-a Mrna 表達；蛋白免疫印跡法檢測巨噬細胞HSP72 表達；另外每組各取10 只觀察術(shù)后五天生存率。 結(jié)果： 1 ．體外實驗：ELISA 結(jié)果顯示Gln 可致LPS 刺激下RAW264.7 細胞TNF-a 釋放量顯著增加，呈時間與劑量依賴性；0.5Mm和8 Mm 組IL-6 釋放量在4h、12h 較0 Mm 組顯著增加（P<0.01），而兩組間IL-6

4、釋放量無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；8 Mm 組IL-10 釋放量在12h、24h時較0 Mm 組顯著增加（P<0.01），在24h時，0.5 Mm組上清液中IL-10 濃度較0 Mm 組明顯升高（P<0.05），而8 Mm 組IL-10濃度較0.5 Mm 組也明顯升高（P<0.05）。三組RAW264.7 細胞在LPS刺激后均有HSP72 表達，與Gln0 Mm、0.5 Mm 組相比，Gln8 Mm 組的RAW264.7 細胞在LPS

5、 刺激4 h 后HSP72 表達明顯增加（P<0.01）。 2．體內(nèi)實驗：ELISA 結(jié)果顯示GLN 組巨噬細胞中TNF-a、IL-6 含量明顯低于CLP 組（P<0.01 或0.05），而與CON 組相比無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；CLP 組和GLN 組血清中TNF-a、IL-6、IL-10含量均高于CON 組，但GLN 組血清TNF-a 含量明顯低于CLP 組（P<0.05）。GLN 組小鼠腹腔巨噬細胞HSP 72 表達較

6、CLP 組和CON組均顯著升高（P<0.01）。CLP和GLN 組巨噬細胞TNF-a Mrna 表達明顯高于CON 組（P<0.01），但兩組間比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。GLN 組小鼠存活時間明顯長于CLP 組（P<0.05）。 結(jié)論：谷氨酰胺在體外和體內(nèi)條件下對巨噬細胞炎癥因子分泌的影響是截然相反的。在體外條件下Gln 可誘導(dǎo)RAW264.7 細胞表達HSP 72 ，卻不能抑制炎癥因子的釋放。Gln 體內(nèi)作用可以抑制膿