25種四川地方晾曬煙遺傳關(guān)系的SRAP分析.pdf

1、晾曬煙是雪茄煙和混合型卷煙的重要生產(chǎn)原料，也是進(jìn)行我國(guó)煙草雜交育種的重要種質(zhì)資源。四川省有悠久的晾曬煙栽培歷史和豐富的地方晾曬煙種質(zhì)資源。然而目前四川省晾曬煙品種的引種、繁種、留種等工作都是由煙農(nóng)自己完成，缺乏系統(tǒng)性的管理。另外，由于沒有標(biāo)準(zhǔn)的煙種命名方法，煙農(nóng)往往根據(jù)煙草植株形態(tài)和葉片特征進(jìn)行命名，這種命名方法用于形態(tài)特征不很明顯的煙草時(shí)極易造成同種異名或同名異種的混亂現(xiàn)象。由于長(zhǎng)期缺乏系統(tǒng)性研究和管理，致使四川許多地方性晾曬煙的品種

2、來(lái)源不清，品種間遺傳關(guān)系不明，這已成為改良和利用晾曬煙的限制性因素。 鑒定晾曬煙種質(zhì)資源是加快晾曬煙品種改良和利用的基礎(chǔ)。分子標(biāo)記由于具有不受環(huán)境和其它因素的影響，穩(wěn)定性和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，在煙草種質(zhì)資源鑒定中被廣泛應(yīng)用。SRAP標(biāo)記技術(shù)是一種新型的基于PCR的標(biāo)記系統(tǒng)。前人研究表明，SRAP標(biāo)記可以很好的應(yīng)用在多種作物的遺傳多樣性研究中。目前SRAP標(biāo)記在煙草種質(zhì)資源上的研究應(yīng)用，在國(guó)內(nèi)外還很少有相關(guān)報(bào)道，其中涉及到晾曬煙資源的

3、更是少之又少。因此將SRAP標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于煙草種質(zhì)資源遺傳多樣性的研究中，尤其是地方晾曬煙的研究分析和鑒定評(píng)價(jià)，有助于更為準(zhǔn)確地鑒定、評(píng)價(jià)現(xiàn)有種質(zhì)資源，為地方晾曬煙種質(zhì)資源的合理利用和優(yōu)良新品種的培育提供更可靠的依據(jù)和選擇手段。 本研究利用SRAP標(biāo)記技術(shù)對(duì)25個(gè)四川地方晾曬煙(Sull-curedtobacco，Nicotianatabacum)材料進(jìn)行了親緣關(guān)系研究，并以1個(gè)烤煙(Flue-curedtobacco，Nico

4、tianatabacum)和1個(gè)黃花煙(Nicotianarustia)材料作為參比；回收了部分特異標(biāo)記條帶進(jìn)行克隆測(cè)序，并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行了簡(jiǎn)單的生物信息學(xué)分析。主要研究結(jié)果如下： 1.對(duì)晾曬煙SRAP-PCR反應(yīng)體系和程序進(jìn)行了優(yōu)化。在本實(shí)驗(yàn)中，晾曬煙SRAP-PCR最佳反應(yīng)體系為：Mg2+濃度1.6mmol/L，1×Buffer，dNTP濃度0.2mmol/L，模版DNA濃度2ng/μL，Taq酶1U，正反引物總含量均為0.

5、5pmol，反應(yīng)總體積為25μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，33℃復(fù)性1min，72℃延伸1min，5個(gè)循環(huán)：94℃變性1min，53℃復(fù)性1min，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸8min，4℃保存。優(yōu)化后的晾曬煙SRAP體系重復(fù)性好、穩(wěn)定性強(qiáng)。 2.從30對(duì)SRAP引物組合中選出擴(kuò)增帶紋豐富、清晰，且多態(tài)性位點(diǎn)百分比較高的引物組合25對(duì)。用此25對(duì)引物對(duì)27份供試煙草材料進(jìn)行擴(kuò)增。根據(jù)

6、數(shù)據(jù)分析采樣原則對(duì)擴(kuò)增條帶進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。共檢測(cè)到3368條擴(kuò)增帶，其中特異性性條帶為998條，平均多態(tài)檢出率為29.6％。說(shuō)明SRAP標(biāo)記技術(shù)可有效應(yīng)用于地方晾曬煙草種質(zhì)的分析。 3.根據(jù)SRAP數(shù)據(jù)計(jì)算出了煙草種質(zhì)材料間的遺傳相似系數(shù)。27份材料的遺傳相似系數(shù)為0.26～0.97，平均為0.62；黃花煙與其它26種普通栽培煙草遺傳差異極其明顯，遺傳相似系數(shù)在0.26～0.51之間：烤煙與其它25份晾曬煙品種之間的遺傳相似系數(shù)也較

7、低，在0.66～0.78之間；25份晾曬煙品種之間的遺傳相似系數(shù)在0.75～0.97之間，平均為0.86，彼此間遺傳相似性較高，而地方晾曬煙品種間遺傳相似有一定差異，但總的遺傳基礎(chǔ)相對(duì)較狹窄。 4.用類平均法(UPGMA)對(duì)27份材料遺傳相似系數(shù)進(jìn)行聚類分析。聚類分析表明，當(dāng)取遺傳相似系數(shù)為0.74時(shí)，可將黃花煙、烤煙和晾曬煙品種明顯區(qū)分開，反映出類型間的遺傳差異；當(dāng)取遺傳相似系數(shù)為0.89時(shí)，可將25份晾曬煙材料3個(gè)大類和2個(gè)