四川姜瘟病菌的RAPD分析.pdf

1、Y783884分類號(hào)$4356四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)號(hào)$200210014砜士學(xué)位論文四川姜瘟病菌的RAPD分析戢俊臣2005年5月摘要姜在我國(guó)栽種歷史悠久，是一種重要的調(diào)味品，也是一種重要的農(nóng)產(chǎn)品，具有很大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在農(nóng)民增收和人民生活中具有極其重要的作用和地位。近年來(lái)，姜瘟病的發(fā)生同益嚴(yán)重，極大地影響了生姜的產(chǎn)量和品質(zhì)。在四川雅安、樂(lè)山、眉山、溫江、簡(jiǎn)陽(yáng)、宜賓等六地調(diào)查姜瘟病的發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)姜瘟引起的生姜產(chǎn)量損失一般在10—30％厶二右，

2、嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致絕產(chǎn)絕收。發(fā)病后，整個(gè)植株丌始變黃，逐漸萎焉，最后倒伏。從發(fā)病生姜上分離得到了致病菌，經(jīng)鑒定為茄勞爾氏菌(RalstoniasoJanacearum)。對(duì)其進(jìn)行了細(xì)菌學(xué)性狀的研究表明：NA，PDA，TTC培養(yǎng)基均比較適合該菌的生長(zhǎng)；不同的溫度、pH值對(duì)其生長(zhǎng)有明顯的影響，最適生長(zhǎng)溫度為32“C，超過(guò)40℃不能生長(zhǎng)：最適pH為75。青枯菌為G一菌，大小051154“m。在生理塵化性狀方面，鑒定了姜瘟病菌利用乳糖、纖維二糖和明膠

3、等碳水化合物以及大分子化合物的情況試驗(yàn)測(cè)定了姜瘟病菌在番茄、辣椒、茄子以及生姜上的致病性，結(jié)果表明：不同的菌株存在明顯的生理分化，且致病性有所不同，從生姜上分離的青枯菌對(duì)生姜致病，對(duì)其他茄科植物的致病力較弱。還鑒定了四川姜瘟病的生物型，發(fā)現(xiàn)其存在I型、III型、Ⅳ型和V型等四個(gè)生物型。其中以III型和I型為主要的生物型，分別占總樣的581％和273％，生物型I在姜上首次報(bào)道。在對(duì)姜瘟病菌進(jìn)行DNA水平上的遺傳多樣性分析時(shí)，我們使用了改進(jìn)

4、的氯化芐法提取供試菌株的DNA，樣品共32個(gè)。經(jīng)過(guò)不同組分濃度的篩選，最終建立了適用于青枯菌RAPD的最佳反應(yīng)體系：反應(yīng)體系25pl，10buffer259l，隨機(jī)引物O39mol／l，模板DNA50ng，dNTP濃度509mol／l，M92濃度25pmol／l，taqDNA聚合酶2OU。反應(yīng)程序：94“C預(yù)變性3min；94“Clmin，36℃lmin，72℃2min，40個(gè)循環(huán)：72“C延伸lOmir14“C保存。并127個(gè)RAPD

5、通用引物中篩選出11條引物，對(duì)32個(gè)菌株的DNA進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，應(yīng)用凝膠圖譜分析軟件分析了32個(gè)菌株的DNA指紋特征，并用ntsys軟件進(jìn)行了聚類分析。RAPD結(jié)果表明，共擴(kuò)增出619條條帶，其中580條為多態(tài)性帶，占937％，擴(kuò)增片段多在0335kb之間。其中，引物OPD07、0PD20、OPl06、0P114、OPKl9、OPQl8的擴(kuò)增多態(tài)性較高，達(dá)到95％以上。通過(guò)聚類，將32個(gè)菌株聚為4大類，I類主要來(lái)自溫江、宜賓以及部分2