耐抽薹大白菜—結(jié)球甘藍(lán)易位系的獲得及抽薹相關(guān)基因的cDNa-AFLP分析.pdf

1、大白菜（Brassica rapa ssp.pekinensis，AA）為種子春化型植物，萌動(dòng)的種子即可感受低溫完成春化，春夏季栽培很容易先期抽薹，使葉球失去商品價(jià)值和食用價(jià)值，給生產(chǎn)造成巨大損失。結(jié)球甘藍(lán)（Brassica oleracea var.capitata）為綠體春化型，較大白菜具有很強(qiáng)的耐抽薹性。本實(shí)驗(yàn)室創(chuàng)制了大白菜染色體組背景下添加1條結(jié)球甘藍(lán)染色體的單體異附加系，其中添加結(jié)球甘藍(lán)4號(hào)染色體的大白菜單體異附加系表現(xiàn)最耐抽

2、薹。本研究在獲得大白菜—結(jié)球甘藍(lán)4號(hào)單體異附加系及其后代小孢子植株的群體基礎(chǔ)上，通過(guò)2年抽薹性鑒定，篩選出耐抽薹和易抽薹植株，并進(jìn)一步利用cDNA-AFLP對(duì)耐抽薹和易抽薹植株進(jìn)行分析。其研究結(jié)果如下:
　　1.以大白菜—結(jié)球甘藍(lán)4號(hào)單體異附加系及其自交后代的616個(gè)來(lái)自不同胚的小孢子植株群體為材料，綜合考慮顯蕾、抽薹、開(kāi)花性狀，采用6級(jí)抽薹調(diào)查分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、5個(gè)抽薹評(píng)價(jià)等級(jí)，通過(guò)2年抽薹性調(diào)查，篩選出60份試驗(yàn)材料，其中45株耐抽薹

3、植株和15株易抽薹植株。
　　2.通過(guò)花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂觀察，初步對(duì)篩選出的耐抽薹植株染色體數(shù)目進(jìn)行鑒定，獲得了耐抽薹大白菜—結(jié)球甘藍(lán)易位系。并對(duì)獲得耐抽薹和易抽薹植株葉片、花器官、中肋、葉球、根等性狀進(jìn)行了觀測(cè)。
　　3.利用cDNA-AFLP技術(shù)，選用256對(duì)引物組合，對(duì)不同春化處理的上述耐抽薹和易抽薹植株葉片差異表達(dá)片段進(jìn)行分離。獲得差異條帶124條，包括1）耐抽薹材料有條帶，易抽薹材料無(wú)條帶的差異條帶71條。包括耐抽

4、薹材料不同春化處理間相關(guān)產(chǎn)物持續(xù)表達(dá)14條，遞增表達(dá)41條、遞減表達(dá)16條;2）耐抽薹材料無(wú)條帶，易抽薹材料有條帶的差異條帶53條。包括易抽薹材料不同春化處理間相關(guān)產(chǎn)物持續(xù)表達(dá)8條，遞增表達(dá)28條，遞減表達(dá)17條。受低溫調(diào)控表達(dá)的差異條帶共10條，包括耐抽薹材料有條帶，易抽薹材料無(wú)條帶的4條;耐抽薹材料無(wú)條帶，易抽薹材料有條帶的2條;耐易材料均表達(dá)的4條。
　　4.選取典型、清晰、穩(wěn)定的差異條帶95條進(jìn)行克隆及Blast分析。利用

5、NCBI進(jìn)行同源性比對(duì)和功能性分析，初步可分為9大類(lèi)，其中能量和新陳代謝類(lèi)基因7個(gè)，占總序列的23.33％;轉(zhuǎn)錄翻譯類(lèi)基因5個(gè)，占總序列的16.67％;信號(hào)傳導(dǎo)類(lèi)基因4個(gè)，占總序列的13.33％;膜和運(yùn)輸類(lèi)基因3個(gè)，占總序列的10％;宿主防御類(lèi)基因2個(gè)，占總序列的6.67％;光合作用類(lèi)基因1個(gè)，占總序列的3.33％;電子傳遞類(lèi)基因1個(gè)，占總序列的3.33％;細(xì)胞壁水解類(lèi)基因1個(gè)，占總序列的3.33％;形態(tài)建成類(lèi)基因1個(gè)，占總序列的3.3