高致病性鍺繁殖與呼吸綜合征病毒TJM-F92疫苗株毒力返強及其對其他疫苗株的免疫干擾研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種以母豬繁殖障礙、仔豬和育肥豬呼吸道疾病為主要特征的傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟損失。免疫疫苗是控制PRRS的有效方法。一般情況下滅活疫苗具有良好的安全性，但不能提

2、供有效保護。PRRSV活疫苗可刺激機體產生細胞免疫與體液免疫應答，但活疫苗存在毒力返強的風險，并且由于PRRSV具有免疫抑制作用，通過傳統(tǒng)方法制備的PRRSV活疫苗一般很難改變其免疫抑制性，接種此類活疫苗會對機體造成免疫抑制，并且會干擾同期免疫的其他活疫苗的免疫應答。
　　高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJM-F92疫苗株(HP-PRRSV TJM-F92)是一株在Nsp2基因存在不連續(xù)30個氨基酸(aa)缺失的同時還存在一段連續(xù)

3、缺失120個aa的弱毒疫苗株。本研究通過將PRRSV TJM-F92株基礎種子接種PRRS健康易感仔豬，連續(xù)在豬體內傳代五代來驗證該疫苗株是否存在毒力返強風險。并開展了PRRSV TJM-F92株對豬瘟兔化弱毒株(CSFV C株)及偽狂犬Bartha-K61疫苗株（PRV Bartha-K61株）的免疫干擾研究。
　　將PRRSV TJM-F92株基礎種子免疫接種PRRS抗原、抗體陰性健康易感豬，采集病毒血癥載毒高峰期（接種病毒后

4、第5日～第9日）的血清樣品，繼代接種易感豬進行5代毒力返強試驗，并對返強第5代分離病毒進行Nsp2基因序列分析，檢驗PRRSVTJM-F92株的安全性及Nsp2基因存在的120個aa在易感動物體內的穩(wěn)定性。試驗結果表明，每代易感豬均未見臨床異常。大體剖檢結果顯示，免疫組與對照組試驗豬肺臟、脾臟、腎臟、肝臟、心臟、扁桃體和淋巴結眼觀無明顯變化。對肺臟進行病理組織學檢測，結果顯示，肺泡結構正常、清晰，支細管周圍有少量淋巴細胞，免疫組與對照組

5、無差異，未見由間質性肺炎引起的損傷。將PRRSV TJM F92經(jīng)豬體內連續(xù)傳代五代后，在TJM-F92株Nsp2區(qū)域存在的120個氨基酸的缺失仍然存在，說明該缺失可在豬體內穩(wěn)定遺傳。試驗結果表明PRRSV TJM-F92疫苗株無毒力返強風險。
　　本研究通過開展高劑量PRRSV TJM-F92株對低劑量CSFV C株或低劑量PRV Bartha-K61株同時免疫與間隔免疫干擾研究，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬二聯(lián)活疫苗對豬

6、的免疫學功能影響試驗，分別從體液免疫、細胞免疫、免疫攻毒及病理學變化等方面比較了毒種聯(lián)合免疫組、毒種間隔免疫組與各毒種單免組在免疫及攻毒后的各項免疫學指標變化情況及攻毒保護情況。結果，高劑量PRRSV TJM-F92株對低劑量CSFV C株或低劑量PRV Bartha-K61株同時免疫、間隔7日免疫或間隔14日免疫，PRRSV TJM F92株對CSFV C株、PRV Bartha-K61株抗體水平無免疫干擾作用，與CSFV C株、PR

7、V Bartha-K61株單免組抗體水平無顯著差異。攻擊CSFV強毒或PRV強毒后，各毒種聯(lián)合免疫組、毒種間隔免疫組試驗動物在臨床癥狀、體溫、攻毒保護率、病理學變化等方面與各毒種單免組試驗動物無顯著差異，各免疫組仔豬全部建活并得到有效保護。對4～6周齡PRRS與PR健康易感仔豬免疫高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬二聯(lián)活疫苗，通過流式細胞儀對試驗動物外周淋巴血液中免疫細胞進行檢測，同時通過檢測抗體效價，統(tǒng)計攻毒保護率，進行病理組織學檢測

8、，并與PRRSV單苗免疫組與PRV單苗免疫組進行比較，結果表明，PRRSV+PRV二聯(lián)苗、PRV單苗組、PRRSV單苗組免疫仔豬后抗體產生情況良好，可刺激機體產生細胞免疫應答，未引起T細胞比例降低，攻毒保護率均為5/5。上述試驗結果表明，PRRSVTJM-F92株疫苗對CSFV C株或PRV Bartha-K61株等活疫苗毒株無免疫抑制作用。
　　綜上所述，PRRSV TJM-F92株不存在毒力返強風險，進一步證明其為一株非常安全