豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5核酸疫苗的研究.pdf

1、四川農業(yè)大學博士學位論文豬繁殖與呼吸綜合征病毒F5核酸疫苗的研究姓名：希尼尼根申請學位級別：博士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：程安春汪銘書20040601中義摘要中文摘要豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5核酸疫苗的研究(希尼尼根，四川農業(yè)大學)本研究在對從四川省分離的豬繁嫡與呼吸綜合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)SCI和SC2株進行細胞培養(yǎng)特性、電鏡觀察和RT—

2、PcR鑒定的基礎上，對ORF5基因進行克隆、鑒定和序列分析，構建了ORF5基因和豬白細胞介素2(IL一2)真核表達戴體(核酸疫苗)，利用Marc一145細胞、小鼠和豬作為模型研究ORF5核酸疫苗在Marc145細胞中表達、在仔豬和小鼠體內的動態(tài)分布及安全性、誘導仔豬體液免疫和細胞免疫的能力、兒一2的免疫增強等作用進行了系統(tǒng)研究，獲得如下結果：1豬繁殖與呼吸綜合征病毒四川分離株0RF5基因的序列及分析：本研究對SCl和SC2分離株的ORF

3、5基因分別進行pGEM—T載體克隆與測序，并進行了同源性比較和進化樹分析，結果，SC一1、SC一2分離株ORF5基因序列與VR一2332株的十分干日似，其核苷酸同源性達到99％，氨基酸同源性為9899％，而與LV株相差甚遠，其核苷酸及氨基酸同源性僅為57％n54％，在進化程度卜四川分離株與美洲型PRRSV有很近的親緣關系，表明，這兩株PRRSV分離毒可能屬于美洲裂。同時用BioEdit、TMHMM20、TreeView等軟件對該基因所推

4、測的GP5進行了分析，結果表明SCl、SC2分離株的GP5各有6個潛在的疏水區(qū)、2個跨膜區(qū)和一個潛在的信號肽。2PRRSVORF5基因真核表達質粒的構建及在Marc145細胞中表達：采用BamHI和EcoRI酶切，通過定向粘末段連接法，分別構建SCI和SC2分離株ORF5基因真核表達質粒pcDNA—SCl～ORF5(核酸疫苗pcDNA—PRRSV—SCl一ORF5)和pcDNASC2一ORF5(核酸疫苗pcDNAPRRSV—SC2一OR