豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離、鑒定及ORF5基因的克隆及變異分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種新的、高度傳染性疾病，臨床上以母豬發(fā)熱、厭食、早產(chǎn)、流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障礙及各種年齡豬的呼吸癥狀和仔豬的高死亡率為特征。該病最早于1987年報道于美國南部，現(xiàn)已遍及世界各地，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。近年來，全國各地很多豬場都出現(xiàn)了以母豬繁殖障礙、仔豬呼吸困難為

2、特征的傳染病。為了弄清病因，解決生產(chǎn)實際，特此開展了豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離和鑒定工作。 利用MARC-145細胞，從河南原陽地區(qū)發(fā)病豬的肺臟中分離到疑似PRRSV毒株，并對其中一株病毒進行了全面的鑒定。該病毒在MARC-145細胞上增殖滴度為10-4．39/0．1ml。能被美洲型PRRSV陽性血清所中和，而不能被抗豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬細小病毒的陽性血清中和。為了進一步從分子生物學(xué)進行鑒定，設(shè)計了特異性引物對病毒的囊

3、膜蛋白基因（ORF6）進行了RT-PCR擴增，擴增到大小約為500bp的片段，與預(yù)期大小相當，而陰性對照則不能擴增出相應(yīng)大小的片段。根據(jù)以上結(jié)果，證實所分離的病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒，并且屬于美洲型，命名為PRRSV HN-Y株。 采用RT-PCR擴增了PRRSV HN-Y株ORF5基因完整cDNA，并進行了克隆與序列測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PRRSV HN-Y株ORF5可編碼200個氨基酸殘基，與PRRSV歐洲型代表株（LV株）、美