廣西豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離及E基因的原核表達.pdf

1、本課題旨在從廣西本地豬場分離毒株，通過與已發(fā)表毒株的對比核苷酸和氨基酸序列，了解廣西PRRS的流行特點。并且以本地分離株為基礎，克隆表達其誘導機體產(chǎn)生中和抗體的E基因，構建成熟的原核表達系統(tǒng)，為今后基因工程疫苗的生產(chǎn)打下基礎。本實驗從廣西以及鄰近省市收集大量疑似病料，進行RT-PCR的檢測，獲得陽性材料后；使用肺泡巨噬細胞(PAM)和非洲綠猴腎細胞的衍生細胞系MARC-145細胞進行病毒的分離；對其E基因進行克隆測序，并與發(fā)表毒株進行比

2、較；隨后，構建E基因的原核表達系統(tǒng)，并進行誘導表達。實驗期間，共收集了79份疑似病料，全部進行RT-PCR檢測，累計獲得42份陽性病料。將所有陽性病料處理后，接種PAM和MARC-1 45兩種細胞，分離到GD株。對其E基因克隆測序后，通過與已發(fā)表毒株的比較，發(fā)現(xiàn)GD株與美洲株的親緣關系較近，而與歐洲株關系較遠。設計了另外一對特異性引物對其E基因進行擴增，并亞克隆進PET-30a，PET-32a載體，經(jīng)過酶切鑒定，證明成功構建E基因的重組