豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及全基因組的測(cè)序與分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以妊娠母豬嚴(yán)重繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為特征的傳染病。PRRS自1987年首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)于美國(guó)以來(lái)，現(xiàn)已遍及世界各主要養(yǎng)豬國(guó)家與地區(qū)，并已成為危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一。豬繁殖與呼吸綜合征病毒是有囊膜的單股正鏈RNA病毒，依據(jù)基因序列分析，可以將PRRSV劃分為兩種基因型，即以VR2332株為代表的北美洲型和以LV株為代表的歐洲型。同其它有囊膜

2、的RNA病毒一樣，PRRSV具有高度的變異性，其毒株之間基因序列存在不同程度差異，而歐美洲型毒株之間差異更大。對(duì)近年來(lái)分離的PRRSV的序列和抗原分析發(fā)現(xiàn)，不同分離株間在毒力、基因序列和抗原性方面都存在著較大的變化。
　　 本實(shí)驗(yàn)從北京和廣東兩地發(fā)生“豬高熱病”的豬場(chǎng)采集病豬的血清和肺臟組織經(jīng)處理后接種MARC-145細(xì)胞，結(jié)果血清接種細(xì)胞沒(méi)有出現(xiàn)病變，而肺臟組織接種的細(xì)胞在盲傳第二代就出現(xiàn)PRRSV所致的特征性病變。用同樣的血

3、清和病料接種的PK-15、BHK-21和MDCK細(xì)胞盲傳3代后均沒(méi)有出現(xiàn)病變。將分離的病毒經(jīng)MARC-145細(xì)胞傳代擴(kuò)大培養(yǎng)后測(cè)定的TCID50分別為10-5.48/0.1mL，10-5.71/0.1mL。用本研究室制備的PRRSV、PRV、HCV、PPV和CSFV陽(yáng)性血清對(duì)分離毒株進(jìn)行中和試驗(yàn)，結(jié)果所分離的病毒只能被美洲型PRRSV陽(yáng)性血清所中和。將病死豬的肺組織和細(xì)胞分離的病毒用透視電鏡進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了3種不同直徑的病毒粒子，其

4、中占主導(dǎo)的一種是直徑60nm左右與PRRSV大小接近的病毒粒子，此外還有120nm左右和30nm左右的兩種病毒粒子。然而在細(xì)胞分離的病毒液樣品中，我們只發(fā)現(xiàn)了60nm左右的一種病毒粒子。以上鑒定證實(shí)了所分離的病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒，將其命名為PRRSV BJ株和GD株。
　　 利用RT-PCR方法分別擴(kuò)增出PRRSV BJ株、GD株各9條基因片段，并將9個(gè)片段分別克隆于PGEM-T-easy質(zhì)粒載體上進(jìn)行測(cè)序，按順序?qū)⑦@些