豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白分段表達(dá)及鑒定.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是以母豬流產(chǎn)及仔豬呼吸系統(tǒng)障礙為主要病征的傳染病,病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。該病毒傳染性強,而且感染機體后致免疫抑制及各種并發(fā)癥,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大危害和經(jīng)濟(jì)損失。病毒基因的變異也給防治增加了難度。

2、糖基化囊膜蛋白5(GP5)是PRRSV的主要結(jié)構(gòu)蛋白,具有結(jié)合細(xì)胞受體及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等功能,而且該蛋白能誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生,是新型疫苗設(shè)計的主要靶蛋白,因此在病毒的生理功能及PRRS的防治上具有重要作用。
　　 PRRSV侵入宿主細(xì)胞首先通過與細(xì)胞膜表面上的特異性受體結(jié)合。利用細(xì)胞內(nèi)吞作用而感染易感細(xì)胞,如猴腎細(xì)胞(MA-104,Marc-145)和PAM。至今已報道了四個獨立但功能相關(guān)的PRRSV細(xì)胞受體:唾液酸粘附素(Sial

3、oadhesin)受體、似肝磷脂蛋白(Heparinlike)受體、波形蛋白(Vimentin)受體、清道夫受體(CD163)蛋白。
　　 本研究利用本試驗室分離保存的一株P(guān)RRSV北美洲型野毒株SD-TA,通過DNAStar軟件分析其GP5蛋白的抗原表位可能性及參考大量文獻(xiàn),將ORF5基因分為4段(79-207,133-330,229-492及382-603)進(jìn)行原核表達(dá)。成功構(gòu)建了pGEX-6p-1原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化入E c

4、oli.BL21(Rosetta)感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)得到四段重組蛋白GP5-1,GP5-2,GP5-3及GP5-4,經(jīng)SDS-PAGE分析,其分子量大小分別為30.9kD,33.3kD,35.9kD及34.5kD。將純化的4段重組蛋白分別免疫Balb/c小鼠,小鼠三免后血清經(jīng)I-ELISA檢測,特異性抗體滴度達(dá)到1:100000,表明4段重組蛋白具有很強的免疫原性。運用IFA方法研究GP5全長蛋白及分段蛋白與PRRSV易感細(xì)