豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因的克隆與原核表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、應用Marc-145細胞擴增豬繁殖與呼吸綜合征福州株病毒(PRRSV FZ)，根據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)已發(fā)表的核苷酸序列，設計了一對特異性引物(P1/P2)，用RT-PCR的方法擴增PRRSV FZ株的全長糖基化囊膜蛋白基因(ORF5)，將擴增產(chǎn)物連接到pMD18 simple T Vector中并轉化入大腸桿菌DH5α中，篩選陽性重組質粒進行序列測定與分析。結果表明，PRRSV FZ株與AY885248.1株的ORF5

2、基因核苷酸的同源為100％，與BJ-4株的核苷酸同源性為99.5％，與美洲株VR-2332的核苷酸同源性為99.3％，而與歐洲型(LV)毒株的同源性則為27.1％，因此此株病毒屬于美洲型毒株。 陽性重組的質?？寺〉皆吮磉_載體pGEX-6p-1(+)上，篩選陽性克隆進行酶切與序列鑒定，結果表明重組表達載體構建成功。將鑒定為陽性的重組表達質粒轉化入表達菌E.coli BL21中，鑒定為陽性者用IPTG進行誘導表達，原核表達產(chǎn)物通過

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