豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及M蛋白基因克隆與序列分析.pdf

1、本研究從重慶地區(qū)分離和鑒定了豬繁殖與呼吸綜合征病毒，并對(duì)分離病毒的M蛋白基因進(jìn)行了克隆和序列分析。試驗(yàn)對(duì)疑似為PRRS病豬的病料采集處理后，接種Marc-145細(xì)胞進(jìn)行病毒培養(yǎng)，從病料中分離了一株P(guān)RRSV，命名為C14-2。試驗(yàn)對(duì)分離病毒進(jìn)行了鑒定，電鏡觀察結(jié)果可見胞漿內(nèi)散布大量呈球形的病毒粒子，直徑為40-60nm；病毒的TCID50為10-5.70/0.1ml；病毒為RNA病毒；C14-2株經(jīng)56℃處理20-30min后喪失對(duì)細(xì)胞

2、的感染力；病毒培養(yǎng)的最佳PH值是6.8-7.0；分離病毒能夠被美洲型的PRRSV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清所中和，其中和指數(shù)為1：27；病毒動(dòng)物回歸試驗(yàn)表明，分離病毒接種40日齡的仔豬，臨床表現(xiàn)體溫升高和一定程度的呼吸癥狀。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)了PRRSV M蛋白基因引物，對(duì)C14-2株的M基因進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增出約550bp的基因片段。試驗(yàn)對(duì)擴(kuò)增的M基因以PMD18-T載體進(jìn)行克隆，篩選獲得重組質(zhì)粒PMD-M，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果顯