豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的新型傳染病。臨床癥狀以感染豬發(fā)熱、厭食和妊娠母豬流產(chǎn)、死產(chǎn)、木乃伊胎、弱仔等繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為主要特征。自1987年首次暴發(fā)該病以來，目前已遍布全世界，給世界各國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。 單克隆抗體是20世紀70年代誕生的一項生物高新技術(shù)，應(yīng)用免疫學(xué)的抗體產(chǎn)生機理和細胞瘤雜交技術(shù)，獲得單一抗原決定簇的高度均一相應(yīng)抗體，該種抗體

2、特異性好、敏感性高，與多克隆血清相比，具有明顯的優(yōu)勢。目前，研究的重點在于如何將特定的單克隆抗體創(chuàng)造性的應(yīng)用于不同領(lǐng)域而實現(xiàn)其應(yīng)用價值。 本實驗選用 Balb/c 小鼠作為實驗動物，采用 SephadexG200 層析柱法提純的PRRSV，將提純的 PRRSV 與等體積的弗氏佐劑充分混勻免疫小鼠，融合前三天加強免疫一次，取脾細胞與SP2/0細胞進行融合，篩選雜交瘤細胞系，共144個孔有融合細胞，融合率為52.17％，用間接ELI

3、SA法進行篩選共獲得11孔陽性孔，陽性率為7.64％，經(jīng)有限稀釋法3次克隆，獲得三株穩(wěn)定分泌PRRSV單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為2B<,7>、5F<,9>和3G<,2>，其純化腹水ELISA效價分別為1:1.28×10<'6>、1：6.4×10<'5>、1：3.2×10<'5>。三株單抗的亞類均為IgG1型。最后對獲得的三株單克隆抗體的特異性、穩(wěn)定性進行了鑒定，結(jié)果證明三株單抗均有很好的特異性和穩(wěn)定性。 靈敏的ELIS

4、A檢測方法的建立，為檢測PRRS提供了一種行之有效的方法，對PRRSV的診斷、免疫學(xué)的研究具有重要意義和應(yīng)用價值。本實驗用PRRSV免疫兔制備兔抗PRRSV多克隆抗體，并用飽和硫酸銨沉淀法純化IgG。將純化的多克隆抗體作為包被抗體，將用HRP(辣根過氧化物酶)標(biāo)記的 McAb2B<,7>作為酶標(biāo)抗體，建立雙夾心ELISA檢測法。實驗對多克隆抗體的最佳包被濃度和酶標(biāo)單抗的最佳工作濃度進行了測定，結(jié)果分別為7.08μg/ml(1：800倍稀