豬繁殖與呼吸綜合征病毒結構蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究首先構建了含PRRSVCH-1a株各結構蛋白的重組表達載體pET30a-N、pGEX6p-rtM、pGEX6p-rtGP5、pET30a-GP4、pGEX6p-rtGP3和pGEX6p-rtGP2，并在大腸桿菌中進行了表達，利用PRRSV感染豬血清對表達產物進行Westernblot分析，證實表達的六個融合蛋白都具有較好的反應活性。然后以PRRSV和表達的融合蛋白為抗原，免疫BALB/c小鼠，最終共獲得了16株針對N蛋白的單抗，1

2、5株針對GP5蛋白的單抗，5株針對GP3蛋白的單抗以及針對M蛋白、GP4蛋白和GP2蛋白的單抗各1株?！　蛋白基因分為四個相互重疊的基因片段，對16株抗N蛋白的單抗進行鑒定?！　±肕基因兩個相互重疊的片段M1(84-134aa)和M2(113-174aa)的融合表達產物對單抗M2B3進行檢測?！　P5基因分為四個相互重疊的基因片段，對15株抗GP5蛋白單抗的抗原表位進行鑒定，結果顯示有2株單抗既與GP5-P3表達產物又與

3、GP5-P4表達產物反應，有13株單抗僅特異性識別GP5-P4的表達產物。用感染豬血清對四個融合蛋白的Westernblot分析結果證實GP5-P4是GP5的免疫優(yōu)勢區(qū)域?！　±梅侄伪磉_重疊基因片段的方法對抗GP3蛋白的5株單抗進行鑒定。并利用氨基酸缺失的方法確定了GP3EP3的主要功能區(qū)域是由W74CRIGHDRCGED85組成，而GP3EP7的主要功能區(qū)域是由Y67EPGRSLW74組成?！　】傊狙芯吭谖覈鳳RRSVCH-1

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