豬繁殖與呼吸綜合征病毒江蘇毒株的分離、鑒定和遺傳進(jìn)化分析.pdf

1、2006年夏季江蘇地區(qū)乃至全國養(yǎng)豬業(yè)爆發(fā)了一場以高熱、呼吸道癥狀、神經(jīng)癥狀等為主要癥狀的“高熱病”。該病的發(fā)病率和死亡率都很高，給國內(nèi)的養(yǎng)豬業(yè)帶來極大的經(jīng)濟(jì)損失。采集江蘇各地區(qū)“高熱”病料；設(shè)計(jì)合成五對(duì)檢測(cè)引物，檢測(cè)幾種引起豬發(fā)熱癥狀的病毒性疾病，用PCR/RT-PCR方法檢測(cè)，共分離獲得22株P(guān)RRSV。為確定該病的病原的相關(guān)生物學(xué)特性，本研究選取具有代表性的從江蘇省沭陽縣某豬場高熱死亡的病死仔豬淋巴結(jié)組織中分離的一株病毒(命名為SH

2、Y-1株)為例，經(jīng)病毒鑒定、病毒生物學(xué)特性測(cè)定，確定其為美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒。人工豬體感染發(fā)病試驗(yàn)表明，該分離株可以引起商品仔豬出現(xiàn)明顯臨床癥狀和死亡，證實(shí)該病毒為高致病性PRRSV毒株。 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的序列，針對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5基因和Nsp2高變區(qū)的基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物，采用RT-PCR方法，對(duì)分離到的22株P(guān)RRSV進(jìn)行ORF5基因序列以及Nsp2部分基因序列的擴(kuò)增，克隆并測(cè)序。應(yīng)用D

3、NAStar軟件將測(cè)序結(jié)果與已發(fā)表的國內(nèi)外的參考毒株進(jìn)行比對(duì)分析。結(jié)果表明，分離的22株病毒ORF5基因大小均為603bp；其中21個(gè)毒株之間同源性為98.5-100％，與國內(nèi)分離株之間同源性為87.7-97％，與國外美洲型分離株同源性為85.6-90.5％；另一株(SIY-1株)與其他21株的同源性為88.1-89.1％，與美洲型參考株VR-2332的同源性為99.5％，而與國內(nèi)分離株的同源性為88.6-98.8％。22株P(guān)RRSV分

4、離株與歐洲型毒株之間的同源性僅為54.1-56.6％。19株用于擴(kuò)增Nsp2高變區(qū)基因序列的PRRSV分離株均在基因組第2778～2780位缺失了3個(gè)堿基(編碼一個(gè)苯丙氨酸)，及2947～3033位缺失了87個(gè)堿基(編碼27個(gè)氨基酸)。其中的兩個(gè)揚(yáng)州分離株在2747～2836位又缺失了90個(gè)堿基(編碼30個(gè)氨基酸)。19個(gè)毒株之間同源性為96.8-99.4％，與VR-2332相比同源性為77.3-78.6％；與國內(nèi)河北、鄭州等地2007

5、年的PRRSV相比同源性為96.8-99.4％。 此外，根據(jù)GenBank中已經(jīng)發(fā)表的中國株的基因序列設(shè)計(jì)了13對(duì)引物，擴(kuò)增SHY-1株以及另一株(JSDT-1)的全基因序列。經(jīng)基因測(cè)序鑒定SHY-1為美洲型PRRSV，其全長為15323bp，包含8個(gè)開放式閱讀框。與美洲型代表株VR-2332相比，該分離株在基因組第2778～2780位缺失了3個(gè)堿基(編碼一個(gè)苯丙氨酸)，在2947～3033位缺失了87個(gè)堿基(編碼27個(gè)氨基酸)