殼聚糖微球制備優(yōu)化及其乙?；⑶蜃鳛闈撛谒ㄈ牧系难芯?pdf

1、經(jīng)導管血管栓塞術(Transcatheter arterial embolization,TAE)是在X射線透視下,經(jīng)導管向靶血管內注入或送入栓塞物質,使血管閉塞從而達到預期治療目的的技術。它通過阻塞血管血流,減少病灶或身體某個特定部位的血液供給達到治療疾病目的。該技術具有微創(chuàng)性、全程影像引導和選擇性靶血管插管技術,使得栓塞的準確性和可控性大大增強,成為革命性的臨床治療方法。微球因其栓塞效果好、對特定組織器官的靶向性高、可以與化療藥結合

2、可緩釋藥物等優(yōu)點,從而受到越來越多的關注,是目前常見的栓塞載體。
　　殼聚糖(Cihitosan)是甲殼質脫乙酰基后得到的一種天然陽離子多糖,化學名稱為β-(1,4)-2-氨基-2-脫氧-D-葡聚糖。具有良好的生物相容性、生物可降解性、天然無毒、抑菌性、抗腫瘤、增強免疫及抗氧化活性等,在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)、生化、化工、環(huán)保等諸多領域都有一定的應用價值。近年來以殼聚糖及其衍生物為原料的有關栓塞劑一直是研究的熱點,其既具有自身優(yōu)良的生物

3、學活性,又可以包載多種藥物,起到物理栓塞和化學治療雙重作用。本文以殼聚糖為原料,采用乳化-交聯(lián)法制備殼聚糖微球(CMs)及乙?；⑶?ACMs),檢測其理化性質及生物相容性,利用乙酰化后的微球進行兔耳模擬栓塞實驗檢測栓塞效果,為臨床應用奠定基礎。
　　采用O/W乳化交聯(lián)法對現(xiàn)有的殼聚糖制備微球,通過單因素分析法和響應面分析法綜合考察了殼聚糖濃度、乙酸濃度、Span80量、甲苯量、乳化轉速、乳化時間、甲醛量和交聯(lián)時間對微球制各的影響

4、,通過Plackett-Burman實驗設計、最陡爬坡實驗及Box-Behnken實驗設計分析各因素的主次效應、優(yōu)化各因素水平,多次實驗后得出微球制備工藝為:2％(w/v)殼聚糖用1.7％(v/v)的醋酸溶解,取100 ml加入含7ml Span80和2ml tween-60的488ml甲苯中,11OO rpm攪拌60min充分乳化,然后加入10ml甲醛溶液再攪拌60min進行固定,最后完成微球的制各。經(jīng)重復實驗得到微球實驗值(8.03

5、g)和理論值(7.93g)相差不大,所得微球表面光滑、球形完整、形狀規(guī)則。
　　經(jīng)乙酰化CMs得到乙?；瘹ぞ厶俏⑶?ACMs),微球表面光滑、球形完整,分散良好。FT-IR顯示ACMs在1595 cm-1處出現(xiàn)乙酰氨基特征吸收峰。殼聚糖、CMs、ACMs的脫乙酰度分別為90.57％、84.83％和20.92％,說明形成微球后有5.7％的氨基發(fā)生交聯(lián)反應,之后又有63.9％的氨基被乙酰化。CMs溶脹率與pH值呈反比,ACMs溶脹率受

6、pH值影響較小。同時,兩種微球溶脹率受環(huán)境溫度影響都很大,隨著溫度升高而增加。微球熱穩(wěn)定性良好,在121℃、150kPa加熱lh無明顯變化,室溫靜置3個月后,形態(tài)依然完整。ACMs在溶菌酶的作用下酶解速度大于CMs,8周后兩者質量分別下降了58.1％和40.7％,降解后的微球表面凹凸不平、出現(xiàn)空腔。
　　兩種微球均能吸附BSA,由于CMs上氨基更多,所以蛋白吸附量比ACMs的大,達到吸附平衡時間也長。ACMs在低濃度(10mg/m

7、l)和高濃度(50m/ml)時溶血率均小于5％,而CMs在高濃度時明顯溶血;ACMs所誘導的血栓形成反應較小,血栓量明顯少于CMs,結果說明ACMs具有良好的血液相容性。MTT法比較了兩種微球對胎鼠成纖維細胞(MEFs)的毒性,MEFs細胞能在稍小粒徑(132μm、260μm)的兩種微球上生長良好,而在大粒徑(429pxn)上無法生長,MEFs在CMs上的增殖率隨著孵育時間的延長而降低,但在ACMs上增殖率隨著孵育時間的延長而上升。通過

8、蛋白吸附、血液相容性、細胞毒性實驗表明ACMs具更好的血液相容性和細胞相容性。
　　對兩種微球進行體內生物安全性評價。材料浸提液無皮膚致敏性和刺激性,對兔眼角膜也無刺激性。以高劑量(O.5ml/10g)通過尾靜脈注射比腹腔注射對動物的刺激略大,注射后24h時體重下降,但之后恢復正常,而腹腔注射對小鼠無影響,表明材料浸提液無潛在急毒性。將微球植入大鼠肌肉后,術后3d、7d、14d時對大鼠肝、腎功能無影響;但植入炎癥反應導致WBC水平

9、升高(P<0.05),7d后之后恢復正常;微球在體內逐漸被降解,沒有引起明顯的組織排異反應,有良好的組織相容性。ACMs栓塞兔耳動脈3d后,兔耳發(fā)炎水腫,耳尖由于血管被堵出現(xiàn)發(fā)黑、結痂現(xiàn)象;栓塞后7d,兔耳消腫,耳尖明顯發(fā)黑、結痂、缺血性壞死;栓塞15d,耳尖部位小動脈萎縮消失,周圍組織干性壞死,部分發(fā)生脫落,與壞死組織交界的邊緣表皮萎縮增厚;結果表明ACMs有明顯栓塞效果。
　　檢測了鹽酸阿霉素(ADM·HCI)載藥微球的包封率

10、、載藥量及體外緩釋行為。兩種微球包封率和載藥量分別為54.8±1.23％、11.1±0.61％,由于脫水作用,導致未干燥的CMs的藥物包封率和載藥量均高于干燥后的微球(分別為62.53％、13.67％)。載藥微球體外釋藥研究表明,兩種載藥微球在pH4.0介質中緩釋率要在比在pH7.2介質中大,且ACMs緩釋效果優(yōu)于CMs,存在明顯緩釋作用。
　　實驗發(fā)現(xiàn)殼聚糖微球,尤其是乙?；瘹ぞ厶俏⑶蚓哂辛己玫难合嗳菪浴⒓毎嗳菪?、組織相容性