磁性殼聚糖微球的制備及其分離降血壓肽的研究.pdf

1、長蛇鯔是我國主要經(jīng)濟(jì)魚類之一，年產(chǎn)量大，其魚肉蛋白質(zhì)酶解后可得到體外對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)具有抑制作用的降血壓多肽，然而從酶解液中分離純化降血壓多肽是一個復(fù)雜繁瑣的過程。本文以生物相容性良好的磁性殼聚糖微球作為固定化載體，偶聯(lián)固定化豬肺粗提ACE作為親和配基，對長蛇鯔酶解液中降血壓肽組分進(jìn)行分離純化，為降血壓肽分離純化技術(shù)提供一定的技術(shù)支持和理論基礎(chǔ)。
　　 采用乳化交聯(lián)法制備了磁性殼聚糖微球，并確定最優(yōu)制備工藝條件為:醋

2、酸溶液濃度為3％，殼聚糖溶液濃度為10 mg·mL-1，水油相之比為1∶6，攪拌速率為800 rpm。對磁性微球進(jìn)行性質(zhì)表征可知，微球平均粒徑為901nm，粒徑均一，并包裹了Fe3O4磁性納米粒子， Fe3O4含量約為28％，呈超順磁性，磁響應(yīng)性良好，可快速分離和富集。
　　 采用環(huán)氧氯丙烷對磁性殼聚糖微球進(jìn)行環(huán)氧基修飾活化，并確定最優(yōu)活化條件為:NaOH溶液濃度為0.9 mol·L-1，環(huán)氧氯丙烷體積分?jǐn)?shù)為40％，NaBH4濃

3、度為0.5 g·L-1，反應(yīng)溫度為40℃，反應(yīng)時間為4h。此時，微球表面環(huán)氧基密度可達(dá)159.23μmol·g-1，活化后的微球可應(yīng)用于酶的固定化。
　　 以環(huán)氧基活化的磁性殼聚糖微球為固定化載體，對豬肺租提血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)進(jìn)行固定化，并確定固定化最優(yōu)工藝條件為:pH為8.3，反應(yīng)溫度為50℃，反應(yīng)時間為1.5 h，酶液蛋白濃度為6 mg·mL-1。最優(yōu)條件下，固定化酶活力為0.048 U·g-1。與游離酶相比，固定化