MicroRNAs在瘢痕疙瘩中差異表達(dá)的研究.pdf

1、[目的]
　　 瘢痕疙瘩的形成受多種基因、細(xì)胞因子的調(diào)控，然而目前對這些基因、細(xì)胞因子的調(diào)控表達(dá)機(jī)制的研究尚不明確；microRNAs是一類內(nèi)源性染色體上非編碼蛋白的RNA，能在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)，與個體發(fā)育、干細(xì)胞分化和疾病發(fā)生密切相關(guān)。研究通過檢測人正常皮膚組織和人瘢痕疙瘩組織中microRNAs的表達(dá)情況，初步篩選人瘢痕疙瘩microRNAs表達(dá)譜。通過本研究，希望為研究microRNAs在瘢痕疙瘩發(fā)病機(jī)制中的作用提

2、供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為瘢痕疙瘩的治療提供新的分子靶點(diǎn)。
　　 [方法]
　　 根據(jù)瘢痕疙瘩臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)要求制定瘢痕疙瘩、正常皮膚病例納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，以此標(biāo)準(zhǔn)收集瘢痕疙瘩標(biāo)本(6例)和正常皮膚標(biāo)本(5例)；TRIZOL法提取標(biāo)本的總RNAs并進(jìn)行質(zhì)檢，再采用Ambion’s miRNA Isolation Kit從總RNAs中分離microRNAs；熒光標(biāo)記后與微陣列芯片雜交，掃描檢測后數(shù)據(jù)經(jīng)SAM和Cluster分析處

3、理，采用median center、hierarchical和average linkage法得到聚類分析圖，篩選瘢痕疙瘩組織中microRNA差異表達(dá)譜。采用實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證在所有瘢痕疙瘩組織中均存在差異表達(dá)的microRNAs。
　　 [結(jié)果]
　　 與正常皮膚組織相比，有263個microRNA在瘢痕疙瘩組織中的表達(dá)發(fā)生了顯著變化，其中171個表達(dá)上調(diào)(Fold Change≥1.50)，92個表達(dá)

4、下調(diào)(Fold Change≤0.67)。Cluster3.0軟件對差異microRNAs進(jìn)行聚類分析，結(jié)合兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)(P<0.05)統(tǒng)計(jì)分析差異表達(dá)microRNAs，篩選出12個在所有瘢痕疙瘩標(biāo)本組織中均存在差異表達(dá)的microRNAs，其中hsa-miR-1290表達(dá)上調(diào)，11個下調(diào)表達(dá)為：hsa-miR-1204、hsa-miRPlus-F1158、hsa-miR-934、hsa-miR-186*、hsa-miR-99b*

5、、hsa-miR-605、hsa-miR-645、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-224*、hsa-miR-551b*、hsa-miRPlus-C1110。采用實(shí)時熒光定PCR(qRT-PCR)方法進(jìn)行差異表達(dá)的miRNAs的驗(yàn)證，結(jié)果與芯片篩選miRNAs表達(dá)結(jié)果相一致。
　　 [結(jié)論]
　　 本研究通過microRNA微陣列芯片篩選得到人瘢痕疙瘩microRNAs差異表達(dá)譜，其可能參與瘢痕疙瘩的發(fā)生發(fā)展