時間分辨熒光免疫分析技術(shù)檢測免疫球蛋白.pdf

1、作為一種新型免疫分析方法,時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)選用稀土絡(luò)合物作為標(biāo)記物,這類標(biāo)記物熒光壽命長、Stokes位移大、特征峰尖銳,因此可以通過延遲測量時間的方法,有效地消除背景熒光的干擾,從而具備了相比一般免疫分析方法更高的靈敏度。
　　本工作的主要目的是建立基于AP酶的ELISA和熒光酶免疫分析(FEIA),以及時間分辨熒光免疫分析方法,其中涉及到稀土螯合物 BBCAP、BHHCT和抗體的偶聯(lián),以及使用時間分辨熒光免

2、疫分析方法進(jìn)行免疫球蛋白抗體的測定。
　　本論文研究的主要內(nèi)容有:
　　(1)以BBCAP作為配體,與羊抗小鼠IgG偶聯(lián),測定其免疫特性。
　　(2)合成BHHCT-羊抗小鼠IgG偶聯(lián)物,并對Eu3+標(biāo)記抗體技術(shù)進(jìn)行了實驗研究,討論了Eu3+濃度、稀釋后的偶聯(lián)物與Eu3+使用液混合后放置時間、Eu3+放置時間、偶聯(lián)物稀釋倍數(shù)、光致漂白效應(yīng)、溫度、Wallac洗液對免疫反應(yīng)的影響。優(yōu)化后采取的實驗條件為:Eu3+使用濃度

3、為1*10-5M,偶聯(lián)物稀釋倍數(shù)為20倍、偶聯(lián)物與Eu3+使用液混合后放置時間為60min。
　　(3)以小鼠IgG為抗原,羊抗小鼠IgG為抗體,建立了競爭酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、熒光酶免疫分析(FEIA)和時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)體系,ELISA、FEIA、TRFIA達(dá)到的靈敏度分別為 IC(20)=2.477μg/mL,IC(50)=21.115μg/mL;IC(20)=2.522μg/mL,IC(50)=3