刺五加種質(zhì)資源的化學(xué)及分子生物學(xué)評(píng)價(jià)研究.pdf

1、目的： 本文旨在建立刺五加種質(zhì)資源的化學(xué)及分子生物學(xué)的評(píng)價(jià)方法，對(duì)來源于不同產(chǎn)地、不同性別的刺五加種質(zhì)資源藥材的質(zhì)量進(jìn)行系統(tǒng)研究，最終找到刺五加道地藥材及其種質(zhì)資源的遺傳學(xué)特性，并為對(duì)優(yōu)良種質(zhì)進(jìn)行強(qiáng)化奠定基礎(chǔ)。 方法： 利用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)來源于不同產(chǎn)地刺五加種質(zhì)資源藥材進(jìn)行化學(xué)評(píng)價(jià)，分別測(cè)定刺五加根和莖中刺五加苷B、綠原酸、異嗪皮啶和刺五加苷D四種活性成分的含量，并研究其與生態(tài)因子關(guān)系；對(duì)不同刺五加

2、種質(zhì)資源進(jìn)行分子生物學(xué)評(píng)價(jià)，應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性分子標(biāo)記(RAPD)方法找出不同產(chǎn)地刺五加種質(zhì)資源及不同性別刺五加種質(zhì)資源的遺傳學(xué)差異，并對(duì)雌性刺五加的特異分子標(biāo)記進(jìn)行克隆和測(cè)序，運(yùn)用序列特異性擴(kuò)增區(qū)域(SCAR)的方法對(duì)雌性刺五加樣品進(jìn)行擴(kuò)增。 結(jié)論： 本研究結(jié)合化學(xué)、生態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)三方面對(duì)不同產(chǎn)地、不同性別刺五加種質(zhì)資源藥材進(jìn)行評(píng)價(jià)。將不同產(chǎn)地刺五加種質(zhì)資源藥材分為化學(xué)型、生態(tài)型和基因型。 1.三個(gè)化學(xué)型包

3、括化學(xué)型Ⅰ：東方紅，五常，綏棱?；瘜W(xué)型Ⅱ：密山，亞布力。化學(xué)型Ⅲ：清河，伊春?；瘜W(xué)型的特點(diǎn)為：刺五加苷B為四個(gè)成刺五加苷B、綠原酸、刺五加苷D、異嗪皮啶中的主成分。三個(gè)化學(xué)型(除異嗪皮啶含量在密山產(chǎn)刺五加種質(zhì)藥材中略有不同外)刺五加苷B、綠原酸、刺五加苷D、異嗪皮啶含量含量順序?yàn)椋夯瘜W(xué)型Ⅰ>化學(xué)型Ⅱ>化學(xué)型Ⅲ。結(jié)果顯示七個(gè)不同產(chǎn)地四個(gè)成分含量差異較大。以刺五加苷B、綠原酸、刺五加苷D、異嗪皮啶的含量為指標(biāo)，伊春產(chǎn)刺五加各成分的含量明顯高

4、于其它產(chǎn)地。 2．三個(gè)生態(tài)型包括生態(tài)型Ⅰ：東方紅；生態(tài)型Ⅱ：綏棱、密山、亞布力；生態(tài)型Ⅲ：伊春、清河、五常。年積溫與刺五加中活性成分相關(guān)性最高。生態(tài)型中年積溫順序?yàn)椋荷鷳B(tài)型Ⅰ>生態(tài)型Ⅱ>生態(tài)型Ⅲ。年積溫與刺五加苷B、綠原酸含量呈負(fù)相關(guān)，與異嗪皮啶和刺五加苷D含量呈正相關(guān)。年積溫為不同產(chǎn)地刺五加種質(zhì)資源藥材活性成分含量的主要影響因素。 3．三個(gè)基因型包括基因型Ⅰ：密山，綏棱，亞布力，東方紅?；蛐廷颍喊ㄎ宄??；蛐廷螅喊?/p>

5、括清河，伊春?；蛐瓦z傳距離順序?yàn)椋夯蛐廷?基因型Ⅱ<基因型Ⅲ。其中伊春產(chǎn)刺五加種質(zhì)資源藥材遺傳多樣性最高。 4．化學(xué)型、生態(tài)型和基因型三者之間的關(guān)系如下刺五加苷B含量高的刺五加種質(zhì)資源藥材與生態(tài)型Ⅲ和基因型Ⅲ的分類相吻合。刺五加苷B含量高的刺五加種質(zhì)在年積溫較低、年平均溫度較低而降雨量較高的區(qū)域出現(xiàn)頻率較高；且其遺傳多樣性較高。刺五加苷B為刺五加活性成分中的主成分，故可推斷環(huán)境因素為年積溫較低、年平均溫度較低而降雨量較高是優(yōu)

6、質(zhì)刺五加種質(zhì)資源藥材的適宜環(huán)境參數(shù)。綠原酸含量高的刺五加種質(zhì)資源與生態(tài)型Ⅱ和基因型Ⅱ的分類相吻合，此種類型刺五加種質(zhì)資源具有高綠原酸含量，中等遺傳多樣性，各環(huán)境因素都較溫和的地區(qū)為綠原酸含量高的刺五加種質(zhì)資源藥材的適宜產(chǎn)區(qū)；刺五加苷D、異嗪皮啶的含量和環(huán)境因素分布趨勢(shì)尚不明確，有待于進(jìn)一步分研究。 5．本研究對(duì)雌性及雄性刺五加種質(zhì)資源進(jìn)行研究，首次獲得了雌性刺五加種質(zhì)資源所特異片段。進(jìn)行BlastX分析證明該雌性刺五加種質(zhì)資源所