雞免疫抑制性病毒的PCR檢測方法優(yōu)化及分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、雞群中常見免疫抑制性病毒主要有5種，分別是IBDV、MDV、ALV、REV及CIAV：除上述5種病毒外，某些毒株的呼腸孤病毒(Reovirus)、新城疫病毒、傳染性喉氣管炎病病毒等也可以造成免疫抑制(Immunosuppressive)。這些病毒除不同程度的引起機體發(fā)生原發(fā)感染甚至死亡之外，更嚴(yán)重的是以亞臨床感染的形式出現(xiàn)，致使感染禽的免疫系統(tǒng)受到損害，引起機體免疫功能下降，導(dǎo)致疫苗免疫效果降低、并發(fā)或繼發(fā)感染其它病原。根據(jù)近年的報道，

2、這幾種免疫抑制病在我國雞群中存在較為普遍，且常常出現(xiàn)多重感染，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。 針對免疫抑制性病毒在我國部分地區(qū)廣泛流行，且往往呈現(xiàn)混合感染的特點，傳統(tǒng)的從病料中直接分離病毒和血清學(xué)方法都很難滿足臨床診斷和做大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查的需要。目前單重PCR、多重PCR已經(jīng)應(yīng)用于這幾種病毒的診斷，并且取得了較好效果。為了更好的應(yīng)用PCR方法檢測免疫抑制性病毒，本研究對目前使用的：PCR檢測方法進行了優(yōu)化，并用優(yōu)化后PCR檢測

3、方法對山東主要養(yǎng)禽地區(qū)不同雞群的雞只進行了免疫抑制性病毒的調(diào)查，進一步了解了幾種主要免疫抑制性疾病在山東的流行特點。針對山東某規(guī)?；N雞場的某些分廠出現(xiàn)的不同日齡種雞及所產(chǎn)商品肉雞NDV免疫后抗體水平明顯偏低，并且所產(chǎn)商品雞飼養(yǎng)到30日齡左右時生長緩慢、大腸桿菌、球蟲及新城疫病毒等感染率明顯升高，對該種雞場的不同日齡種雞及商品雞進行了免疫抑制病毒檢測和NDV抗體水平的檢測，表明免疫抑制性病毒的感染對該雞場的發(fā)病起了重要的作用。

4、本研究分2個部分： 1．雞免疫抑制病毒PCR檢測方法的優(yōu)化及應(yīng)用`為進一步優(yōu)化免疫抑制性疾病PCR檢測方法，在確保與MDV、REV、ALV及CIAV的PCR檢測方法反應(yīng)程序一樣的條件下，參照已發(fā)表IBDV毒株序列，在結(jié)構(gòu)蛋白VP2編碼基因的高變區(qū)(VP2 variable domain,vVP2)兩端外側(cè)的保守序列內(nèi)設(shè)計合成了2對寡核苷酸引物，對包括疫苗株在內(nèi)的10株參考毒株進行逆轉(zhuǎn)錄酶一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測。結(jié)果

5、10個參考毒株均能擴增出約492bp的目的片段，而對作為陰性對照的常見5種雞病病原NDV、IBV、CIAV、B．a(chǎn)vium、E．coli均沒有擴增出任何片段；同時經(jīng)臨床檢驗、序列分析表明，該檢測技術(shù)可用于臨床病料、細(xì)胞毒及雞胚毒的檢測。優(yōu)化后的PCR．檢測技術(shù)能同時一次性檢測5種病原，大大方便了臨床病例的檢測和大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查。運用優(yōu)化后的PCR檢測方法，對來自山東主要養(yǎng)禽地區(qū)收集、送檢的18個雞群278羽雞進行免疫抑制性病毒的檢測。

6、結(jié)果五中免疫抑制病毒的感染率分別為CIAV(46.04％)、MDV(14.03％)、IBDV(12.95％)、REV(2.51％)及ALV(2.16％)，其中被檢雞混合感染的總陽性率為21.58％。 2．山東某規(guī)?；u場免疫抑制性病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及雞群ND疫苗免疫效果分析為了解AA肉種雞群中免疫抑制性病毒的存在狀況及其對NDV疫苗免疫效果和對商品雞生長的影響，采用多重PCR、RT-PCR和血清學(xué)方法對山東某規(guī)?；笮虯A父母

7、代肉種雞場的28日齡、180日齡左右種雞及其所生產(chǎn)的1日齡、30日齡左右商品雞進行IBDV、MDV、ALV、REV、CIAV及REOV感染狀況調(diào)查，并同時對雞群NDV免疫后抗體水平進行跟蹤監(jiān)測，結(jié)果表明種雞和商品雞均存在CIAV的感染，并不同程度的存在CIAV與MDV、IBDV等共感染；發(fā)病雞群NDV抗體水平明顯偏低的原因是由于雞群感染免疫抑制性病毒所致；種雞群感染CIAV并垂直傳播給商品雞，間接引起了商品雞發(fā)生免疫抑制性病毒的共感染，